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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因敲除后功能验证需要做回补试验么？都说小木虫大神多。。。
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ljyueliang

新虫 (小有名气)

[求助] 基因敲除后功能验证需要做回补试验么？都说小木虫大神多。。。

各位虫友，我做的实验是敲除了一个大肠杆菌中的基因，并提取产物验证其功能，要是想证明这个基因的功能，一定需要做基因回补实验么？希望大神们不吝赐教、、、
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1楼 2013-07-19 20:43:32
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也不懂，难道WT进行对照不行吗？
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2楼2013-07-19 22:24:40
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wangzhou79

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-20 11:52:41
如果是通过敲除的方法来确定基因的功能，理论上来说是需要进行回补实验的，一方面通过回补后表型的回复来确定该基因的功能，另一方面，也能保证你的敲除没有影响到其他基因的正常转录表达。
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人若志趣不远，心不在焉，虽学无成！
3楼2013-07-19 22:35:56
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qinhua818

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:16:24
除需要进行基因回补实验，还要在通过体外生化实验验证功能，才能说明该基因的功能
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4楼2013-07-20 16:15:38
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
同意楼上两位.
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5楼2013-07-21 01:18:29
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hongyz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-21 07:49:16
ljyueliang: 金币+40, ★★★★★最佳答案, 谢谢老师~ 2013-07-21 21:24:33
必需进行基因回补。可以是低拷贝质粒，也可以插入染色体进行单拷贝回补。

我以前审的几篇文章，没有回补都让我拒稿了。
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6楼2013-07-21 01:41:02
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double7414

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ljyueliang: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2013-07-22 15:09:22
不回补怎么能排除极性效应呢，投文章的评审一定会问这个问题的
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7楼2013-07-22 11:45:33
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yoyoyou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qinhua818 at 2013-07-20 16:15:38
除需要进行基因回补实验，还要在通过体外生化实验验证功能，才能说明该基因的功能

谢谢回复~额，实验计划是先确定基因已经成功回补回去，再进行生物表征实验来说明目的基因功能性的。现在的问题是，缺失突变株是用了氯霉素基因替代目的基因，现在我回补的话，虽然利用目的基因引物可以扩增出目的条带，但是长片段却不可以，这是为什么呢
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8楼2018-07-04 19:35:26
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