应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » 【求助】包涵体表达与可溶性表达
71/1返回列表
查看: 3336  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】包涵体表达与可溶性表达

请大家说一下可溶性表达比包涵体表达的优势有哪些？谢谢，最好全面一些哈~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-07 22:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happychick

木虫 (著名写手)
★ ★
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11
许多外源蛋白在大肠杆菌蛋白表达系统中表达后都是以包涵体形式存在，包涵体是一种致密、不可溶的颗粒。一般情况下，形成包涵体表达产率都很高，并且容易分离得到比较纯的包含体。包涵体致密的结构有助于防止蛋白酶对它的降解作用，如果毒性较强的蛋白形成包涵体也就不会对细胞产生太大的损伤。如果做蛋白表达的目的是为了作为抗原制备抗体，那么出现包涵体也可以，可以用PBS将包涵体悬浮，使用佐剂将溶液乳化后注射进入动物体内进行免疫。
   包含体的形成分析原因之一在于表达量过高，表达产物来不及折叠为活性形式—多数以高表达见长的蛋白表达系统都会得到包含体产物。如果融合蛋白表达含有标签，常用的做法是将包涵体用尿素溶解后在变性的情况下进行纯化，然后复性。但是，在溶解之前应该还要确定一下，蛋白是确实不可溶还是细胞裂解不完全。利用相差显微镜或者染色后对细胞裂解物进行观察，如果仍可以看到完整的细胞或者裂解后的沉淀和之前收集细胞沉淀大小相似，则可能意味着细胞没有被彻底裂解而导致检测不到产物。如果形成了包涵体，在比较高倍的（>400×）光镜下可以观察到大肠杆菌中有致密的结构。因为包涵体可能会占据细胞一半体积。
    如果希望得到能行使功能的蛋白，蛋白应该以可溶形式表达。避免包涵体形成的方法很多，比如：选用表达量不高的蛋白表达系统，选择有助于可溶性表达的融合蛋白表达系统等，使用基本培养基等也有助于可溶性表达。另外一个容易忽视的问题是大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成，同样容易导致表达产物不溶，更换菌株有助于解决这个问题。
赞一下(5人) 回复此楼
2楼2011-03-16 09:44:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happychick

木虫 (著名写手)
其实最重要的还是看蛋白的性质，适合哪种形式的表达。
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-16 09:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by happychick at 2011-03-16 09:45:58:
其实最重要的还是看蛋白的性质，适合哪种形式的表达。

谢谢~~~~
回复此楼
4楼2011-03-16 19:03:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爨乡主人

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能可溶性表达的最好可溶性表达，可溶的蛋白一般都活性。如果表达成了包涵体，后续纯化非常复杂，而且在复性过程中很难做到完全复性。能达到50%就易经很高了，我正在做包涵体的表达纯化，纯化后回收率太低，做着很受挫。
赞一下 回复此楼
5楼2014-06-12 19:35:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主没有弄清楚一些概念：可溶性是可溶性，上清是上清，包涵体是包涵体，上清一定是可溶性，但是可溶性不一定是上清，因为包涵体也是可溶性的，而且只要是高一点的技术是保证包涵体一定是真正可溶性的
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-28 11:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶大大大的

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
摸索好了表达条件，过一段时间又不可溶了是怎么回事
赞一下 回复此楼
7楼2016-03-07 13:57:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 老实人sdu3375 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +7 不知道叫什么！ 2026-03-15 8/400 2026-03-15 20:11 by 棒棒球手
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-15 5/250 2026-03-15 18:38 by 无际的草原
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 一志愿天津大学，英一数二305分求调剂，四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭