| 查看: 3362 | 回复: 6 | |||
[交流]
【求助】包涵体表达与可溶性表达
|
| 请大家说一下可溶性表达比包涵体表达的优势有哪些？谢谢，最好全面一些哈~ |
回复此楼» 猜你喜欢
288求调剂，一志愿华南理工大学071005
已经有5人回复
-
一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂
已经有5人回复
-
294求调剂材料与化工专硕
已经有12人回复
-
0856调剂，是学校就去
已经有5人回复
-
0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章
已经有13人回复
-
梁成伟老师课题组欢迎你的加入
已经有11人回复
-
复试调剂
已经有6人回复
-
0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历
已经有11人回复
-
321求调剂
已经有10人回复
-
东华理工大学化材专业26届硕士博士申请
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌BL21表达包涵体的问题
已经有8人回复
- 如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体
已经有19人回复
- 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
已经有17人回复
- 关于重组蛋白包涵体的溶解及复性
已经有5人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- 融合表达蛋白酶的表达
已经有26人回复
- 蛋白表达量的提高
已经有24人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 可溶性蛋白和包涵体
已经有3人回复
- 【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
已经有17人回复
- 包涵体变性复性
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
青岛高校2026招生硕士研究生
+5/835
-
农业信息工程技术（专硕）招收调剂 沈阳农业大学
+1/192
-
山东征女友，坐标济南
+1/164
-
南京医科大学生殖医学与子代健康国重实验室-董飞宏课题组-学术硕士招生
+1/95
-
春天就该逛吃逛吃
+1/88
-
加拿大阿尔伯塔大学招收电磁、无线通信、机器学习方向全奖硕士/博士/博士后/访问学者
+1/53
-
光学工程学硕调剂信息
+2/44
-
华南师范大学（211）博士招生- 电子、自动化、机械、生物学、物理相关专业
+2/42
-
从专科一路到211硕士，到TOP5博士，也想进高校体制
+1/38
-
1
+1/33
-
招硕士调剂生
+2/24
-
湖南大学微生物结构与功能实验室2026年计划招收博士研究生
+1/21
-
中国民航飞行学院先进连接团队招收航空宇航、航空机械专业硕士研究生（学硕专硕均可）
+1/7
-
香港大学David Srolovitz教授课题组招聘「香江学者」博士后
+1/6
-
26年申博自荐-计算机视觉
+1/6
-
镇江托尔化学有机合成研发岗位工作机会
+1/4
-
南京理工大学2026级硕士生招生-张光普博导 &硕导
+2/4
-
欢迎加入赣南师范大学先进光电子研究中心
+1/4
-
上海交通大学化学化工学院张智涛课题组诚聘博士后
+1/1
-
北航国新院郑爽教授2026年招生招聘（江雷院士团队/仿生界面材料全国重点实验室）
+1/1
★ ★
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11
|
许多外源蛋白在大肠杆菌蛋白表达系统中表达后都是以包涵体形式存在，包涵体是一种致密、不可溶的颗粒。一般情况下，形成包涵体表达产率都很高，并且容易分离得到比较纯的包含体。包涵体致密的结构有助于防止蛋白酶对它的降解作用，如果毒性较强的蛋白形成包涵体也就不会对细胞产生太大的损伤。如果做蛋白表达的目的是为了作为抗原制备抗体，那么出现包涵体也可以，可以用PBS将包涵体悬浮，使用佐剂将溶液乳化后注射进入动物体内进行免疫。 包含体的形成分析原因之一在于表达量过高，表达产物来不及折叠为活性形式—多数以高表达见长的蛋白表达系统都会得到包含体产物。如果融合蛋白表达含有标签，常用的做法是将包涵体用尿素溶解后在变性的情况下进行纯化，然后复性。但是，在溶解之前应该还要确定一下，蛋白是确实不可溶还是细胞裂解不完全。利用相差显微镜或者染色后对细胞裂解物进行观察，如果仍可以看到完整的细胞或者裂解后的沉淀和之前收集细胞沉淀大小相似，则可能意味着细胞没有被彻底裂解而导致检测不到产物。如果形成了包涵体，在比较高倍的（>400×）光镜下可以观察到大肠杆菌中有致密的结构。因为包涵体可能会占据细胞一半体积。 如果希望得到能行使功能的蛋白，蛋白应该以可溶形式表达。避免包涵体形成的方法很多，比如：选用表达量不高的蛋白表达系统，选择有助于可溶性表达的融合蛋白表达系统等，使用基本培养基等也有助于可溶性表达。另外一个容易忽视的问题是大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成，同样容易导致表达产物不溶，更换菌株有助于解决这个问题。 |
2楼2011-03-16 09:44:33
3楼2011-03-16 09:45:58
4楼2011-03-16 19:03:01
5楼2014-06-12 19:35:03
6楼2015-10-28 11:05:35
7楼2016-03-07 13:57:17
