| 查看: 2653 | 回复: 8 | ||
zcqh27木虫 (正式写手)
|
[求助]
大肠杆菌BL21表达包涵体的问题 已有1人参与
|
|
本人利用一重组大肠杆菌BL21表达某种蛋白，蛋白最终是以包涵体的形式表达的。在摇瓶中先30°，200r/min培养，然后温度升高到42°诱导，4h后下摇瓶。 离心收集菌泥，然后用tris-hcl重新悬浮（w/v=1：10）,超声破碎菌体。 低温离心得到包涵体，并反复洗涤。 得到的包涵体直接跑电泳，有目的条带，而且含量较高。 包涵体变复性以后，跑电泳，也是有目的条带的，但是上液相检测，却什么也没有。 现在怀疑是两个方面出问题了，首先是菌株，会不会是菌株不能表达相关的蛋白了，但是为什么电泳还会有结果呢？另一个就是说变复性出问题了，但是即使变复性出问题，为什么跑电泳有结果，而液相检测却没有产物呢，况且变复性的方法换了好几种了，结果都不行。 哪位大神能提点建议啊！拜谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
小木虫没落了，除了祈祷帖子，几乎看不到有价值的帖子
已经有15人回复
-
面上的水很深
已经有18人回复
-
国社科通讯评审
已经有5人回复
-
5个%2F，非固定段22个字母
已经有9人回复
-
生命口C13面上会评时间
已经有11人回复
-
内心匮乏
已经有16人回复
-
生命口面上会评结束了吗大家有知道结果吗？现在还没有结果正常不？
已经有9人回复
-
投英文期刊如何查重
已经有6人回复
-
伯胺上甲基求助
已经有7人回复
-
跨出版社商投稿
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 我的蛋白在大肠杆菌中表达量低怎么办？
已经有7人回复
- IPTG诱导表达的问题
已经有12人回复
- 求助大肠杆菌发酵问题
已经有15人回复
- 大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显
已经有5人回复
- pET28a载体和目的基因
已经有9人回复
- 蛋白表达量的提高
已经有24人回复
- 小木虫也建一个菌种库和质粒库吧
已经有11人回复
- T7载体的IPTG诱导
已经有10人回复
- 连接转化进大肠杆菌BL21
已经有6人回复
- 目的蛋白表达的问题
已经有20人回复
- TEV酶的纯化出问题了，求解？？、
已经有9人回复
- 关于DH5a和BL21的表达问题？？
已经有9人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事
已经有17人回复
- 基因工程菌 诱导表达
已经有8人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌BL21的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- 【求助/交流】pET21转不进BL21 什么原因？
已经有9人回复
Sthunder
木虫 (正式写手)
- 应助: 130 (高中生)
- 金币: 2337.8
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 308
- 在线: 176.6小时
- 虫号: 2551016
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-08-04 22:15:06
zcqh27
木虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 3963.5
- 散金: 141
- 帖子: 639
- 在线: 164.9小时
- 虫号: 1117804
- 注册: 2010-10-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2013-08-04 22:59:49
Sthunder
木虫 (正式写手)
- 应助: 130 (高中生)
- 金币: 2337.8
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 308
- 在线: 176.6小时
- 虫号: 2551016
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-08-04 23:37:57
yfzhang2008
木虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 2039.3
- 红花: 2
- 帖子: 229
- 在线: 135.6小时
- 虫号: 378307
- 注册: 2007-05-21
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2013-08-07 08:19:23
zcqh27
木虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 3963.5
- 散金: 141
- 帖子: 639
- 在线: 164.9小时
- 虫号: 1117804
- 注册: 2010-10-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2013-08-07 20:43:48
hunter1984
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 839.9
- 帖子: 125
- 在线: 24.9小时
- 虫号: 403532
- 注册: 2007-06-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2013-11-27 13:19:05
|
本帖内容被屏蔽 |
8楼2016-05-21 14:33:50
|
本帖内容被屏蔽 |
9楼2016-05-21 14:35:01