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zcqh27木虫 (正式写手)
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大肠杆菌BL21表达包涵体的问题 已有1人参与
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本人利用一重组大肠杆菌BL21表达某种蛋白，蛋白最终是以包涵体的形式表达的。在摇瓶中先30°，200r/min培养，然后温度升高到42°诱导，4h后下摇瓶。 离心收集菌泥，然后用tris-hcl重新悬浮（w/v=1：10）,超声破碎菌体。 低温离心得到包涵体，并反复洗涤。 得到的包涵体直接跑电泳，有目的条带，而且含量较高。 包涵体变复性以后，跑电泳，也是有目的条带的，但是上液相检测，却什么也没有。 现在怀疑是两个方面出问题了，首先是菌株，会不会是菌株不能表达相关的蛋白了，但是为什么电泳还会有结果呢？另一个就是说变复性出问题了，但是即使变复性出问题，为什么跑电泳有结果，而液相检测却没有产物呢，况且变复性的方法换了好几种了，结果都不行。 哪位大神能提点建议啊！拜谢。 |
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