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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pET21转不进BL21 什么原因？
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zehego

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pET21转不进BL21 什么原因？已有7人参与

前段时间做原核表达，pET21载体转M15可以，不过没有表达，google下可能是因为pET21是T7启动子 M15表达的是T5 RNA聚合酶  还望高手指教！   
然后转BL21 无数次 但从来没有成功过，再转Rosetta，转成功，但无表达，再转Origami好像可以了...  

想请教下为什么转BL21不成功呢？ 很好奇的问。
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1楼2010-05-31 15:01:17
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从何判断转BL21不成功？没有克隆？感受态是好的么？有做对照么？
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2楼2010-05-31 21:25:00
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PET要用BL21(DE3)进行表达
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3楼2010-05-31 23:34:41
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zehego

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-05-31 21:25:00:
从何判断转BL21不成功？没有克隆？感受态是好的么？有做对照么？

就只是用amp筛选了一下......  以为筛选过的就是转成功的 就是自己想要的 同时转的还有其它东西  其它的东西都转进去了 并且有蛋白表达  ...  不知道这样算不算说的过去  毕竟只是想要蛋白...
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4楼2010-06-10 20:57:03
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zehego

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by nicknelson at 2010-05-31 23:34:41:
PET要用BL21(DE3)进行表达

菌株是从别人那里拿来的  应该是DE3的吧  不然其它的蛋白也不会表达了   是不是这样阿？  ^_^
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5楼2010-06-10 20:57:55
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wufengjian

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
表达的蛋白有毒性？杀死了细菌。
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6楼2010-06-10 23:44:27
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你先了解下PET系统和DE3吧。PET系统我印象中大多是利用T7 RNA聚合酶系统。PET载体利用病毒T7 RNA聚合酶来进行转录目的蛋白，但是细菌里没有T7 RNA聚合酶，所以我们把T7 RNA聚合酶的基因导入到细菌的基因组中，这样改构过的菌株叫做DE3。因此PET的载体只能在DE3的菌株里表达。BL21和BL21(DE3)是不一样的。
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7楼2010-06-11 18:04:56
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那就用表达的就行了，干吗纠结着呢多，原始么，上面说了的，是DE3的么？用Origami就行了～roseta就不知道了，菌株有问题的？
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8楼2010-06-12 11:09:09
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jingquan

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
DE3制备时，各管的情况不同，是而转化后表达情况也不同。
保存于-80度冰箱，甘油浓度过大，对转化也有影响。
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9楼2010-06-27 00:15:09
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fangfang_

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主有pet21载体吗，急求，有pet28a及30a ，也可以交换！
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10楼2013-05-29 15:45:57
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