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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组 质粒在BL21表达
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wsz2056

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组 质粒在BL21表达 已有8人参与

重组质粒，为什么在BL21 中表达不出来，IPTG1M，终浓度0.5，诱导时间过夜，温度20-25度个不等 ，但是就是不表达。
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1楼 2011-03-14 15:27:37
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对质粒进行鉴定了吗？重组是否成功？
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2楼2011-03-14 16:20:37
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不表达的因素很多，如ORF、密码子偏爱性等等。
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3楼2011-03-14 16:28:59
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-03-14 17:57:04
先用Rosetta 试一下，如果还不行就换个载体。
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4楼2011-03-14 17:20:25
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
具体什么原因不是很清楚
只是给点建议吧，你的IPTG的0.5单位是什么？这个东西浓度不能太高，一般作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
还有就是你的培养温度为什么那么低呢？这样的温度可以时间再稍微长点
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严于律己，宽以待人
5楼2011-03-14 19:17:50
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wsz2056

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 最爱花诗雨 at 2011-03-14 19:17:50:
具体什么原因不是很清楚
只是给点建议吧，你的IPTG的0.5单位是什么？这个东西浓度不能太高，一般作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
还有就是你的培养温度为什么那么低呢？这样的温度可以时 ...

知道了  谢谢
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6楼2011-03-15 10:43:23
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wsz2056

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chenshuai1238 at 2011-03-14 16:20:37:
对质粒进行鉴定了吗？重组是否成功？

成功了
谢谢诶
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7楼2011-03-15 10:43:55
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
培养基里有糖的成分吗?如果有糖会抑制表达。如果基因中稀有密码子比较多也容易导致无法表达。
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8楼2011-03-15 10:53:08
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也碰到这样的问题，不过不是不表达，而且表达量很低很低，以前还好好的
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你的日子如何，你的力量也必如何！
9楼2011-03-15 13:32:19
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_然然

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问楼主解决这个问题了吗  想听下文
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10楼2011-03-30 12:56:06
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