24小时热门版块排行榜

返回列表

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 2503.1
帖子: 535
在线: 652.5小时
虫号: 945286

[交流] 【求助】包涵体表达与可溶性表达

请大家说一下可溶性表达比包涵体表达的优势有哪些？谢谢，最好全面一些哈~

回复此楼

» 猜你喜欢

青椒八年已不青，大家都被折磨成啥样了？已经有5人回复
青年基金C终止已经有3人回复
26申博求博导推荐-遥感图像处理方向已经有4人回复
限项规定已经有7人回复
救命帖已经有8人回复
招博士已经有4人回复
西南交通大学国家级人才团队2026年博士研究生招生（考核制）—机械、材料、力学方向已经有3人回复
英文综述是否需要润色及查重已经有5人回复
为什么nbs上溴没有产物点出现呢已经有9人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

大肠杆菌BL21表达包涵体的问题已经有8人回复
如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体已经有19人回复
请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的? 已经有17人回复
关于重组蛋白包涵体的溶解及复性已经有5人回复
pET28a载体蛋白表达为包涵体已经有5人回复
原核表达和SDS-PAGE 已经有9人回复
融合表达蛋白酶的表达已经有26人回复
蛋白表达量的提高已经有24人回复
原核表达形成了包涵体怎么办啊？已经有22人回复
β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性已经有24人回复
求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？已经有17人回复
可溶性蛋白和包涵体已经有3人回复
【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题已经有17人回复
包涵体变性复性已经有11人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-03-07 22:19:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

happychick

木虫 (著名写手)

应助: 3 (幼儿园)
贵宾: 0.062
金币: 3672.5
帖子: 1187
在线: 286.7小时
虫号: 1187676

★ ★
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11

许多外源蛋白在大肠杆菌蛋白表达系统中表达后都是以包涵体形式存在，包涵体是一种致密、不可溶的颗粒。一般情况下，形成包涵体表达产率都很高，并且容易分离得到比较纯的包含体。包涵体致密的结构有助于防止蛋白酶对它的降解作用，如果毒性较强的蛋白形成包涵体也就不会对细胞产生太大的损伤。如果做蛋白表达的目的是为了作为抗原制备抗体，那么出现包涵体也可以，可以用PBS将包涵体悬浮，使用佐剂将溶液乳化后注射进入动物体内进行免疫。
包含体的形成分析原因之一在于表达量过高，表达产物来不及折叠为活性形式—多数以高表达见长的蛋白表达系统都会得到包含体产物。如果融合蛋白表达含有标签，常用的做法是将包涵体用尿素溶解后在变性的情况下进行纯化，然后复性。但是，在溶解之前应该还要确定一下，蛋白是确实不可溶还是细胞裂解不完全。利用相差显微镜或者染色后对细胞裂解物进行观察，如果仍可以看到完整的细胞或者裂解后的沉淀和之前收集细胞沉淀大小相似，则可能意味着细胞没有被彻底裂解而导致检测不到产物。如果形成了包涵体，在比较高倍的（>400×）光镜下可以观察到大肠杆菌中有致密的结构。因为包涵体可能会占据细胞一半体积。
如果希望得到能行使功能的蛋白，蛋白应该以可溶形式表达。避免包涵体形成的方法很多，比如：选用表达量不高的蛋白表达系统，选择有助于可溶性表达的融合蛋白表达系统等，使用基本培养基等也有助于可溶性表达。另外一个容易忽视的问题是大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成，同样容易导致表达产物不溶，更换菌株有助于解决这个问题。