| 查看: 3342 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助】包涵体表达与可溶性表达
|
|||
| 请大家说一下可溶性表达比包涵体表达的优势有哪些？谢谢，最好全面一些哈~ |
回复此楼» 猜你喜欢
材料与化工304求B区调剂
已经有7人回复
-
0703化学336分求调剂
已经有4人回复
-
[复试调剂]西南科技大学国防/材料导师推荐
已经有6人回复
-
化学工程321分求调剂
已经有12人回复
-
211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习
已经有4人回复
-
材料专硕326求调剂
已经有5人回复
-
东南大学364求调剂
已经有5人回复
-
国自科面上基金字体
已经有7人回复
-
药学383 求调剂
已经有4人回复
-
286求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌BL21表达包涵体的问题
已经有8人回复
- 如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体
已经有19人回复
- 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
已经有17人回复
- 关于重组蛋白包涵体的溶解及复性
已经有5人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- 融合表达蛋白酶的表达
已经有26人回复
- 蛋白表达量的提高
已经有24人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 可溶性蛋白和包涵体
已经有3人回复
- 【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
已经有17人回复
- 包涵体变性复性
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
坐标上海，诚征女友，非常 着急，私信必回
+1/490
-
西湖大学工学院智能微型机器人实验室博士后招聘启事
+4/236
-
深圳技术大学集成电路与光电芯片学院郝俊杰课题组诚聘博士后、研究助理、访问学生
+2/132
-
测试█TEM/ EPR/ XPS/PY-GCMS/TG-IR/XRF/BET/MIP/核磁/EA/ICP，VX: 761711562。
+1/85
-
哈工大本部-电化学新能源方向博士捡漏名额
+1/77
-
关于碳量子点抗菌的研究
+1/35
-
天津工业大学航空航天博士招生
+1/35
-
Call for paper: Frontiers in Plant Science 中科院2区
+2/24
-
国家级领军人才团队高分子材料方向2026年博士研究生招生
+1/16
-
医学327分专硕调剂
+1/16
-
北京某研究院生物化学与分子生物学相关专业申请考核制博士招生（春季）
+1/15
-
2026年上海大学王亮课题组招收电催化或光催化研究背景的博士生
+2/10
-
上海科技大学物质学院招收有机化学方向2026级工程博士
+1/7
-
课题组招收环境及相关专业调剂硕士研究生（欢迎优秀学生加入）
+1/7
-
中国民航飞行学院先进连接团队招收航空宇航、航空机械专业硕士研究生（学硕专硕均可）
+1/7
-
国家蛋白质科学中心(北京)-哈尔滨工业大学联合培养招收博士
+1/6
-
连发两篇 Nature！大样本单细胞测序解析认知、衰老与灵长类进化
+1/3
-
课题组招收环境及相关专业调剂硕士研究生（欢迎优秀学生加入）
+1/2
-
五邑大学环境与化学化工学院欢迎化学、化工、材料背景考生报考
+1/1
-
欢迎报考浙江工业大学埃克塞特联合学院硕士研究生
+1/1
4楼2011-03-16 19:03:01
★ ★
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11
|
许多外源蛋白在大肠杆菌蛋白表达系统中表达后都是以包涵体形式存在，包涵体是一种致密、不可溶的颗粒。一般情况下，形成包涵体表达产率都很高，并且容易分离得到比较纯的包含体。包涵体致密的结构有助于防止蛋白酶对它的降解作用，如果毒性较强的蛋白形成包涵体也就不会对细胞产生太大的损伤。如果做蛋白表达的目的是为了作为抗原制备抗体，那么出现包涵体也可以，可以用PBS将包涵体悬浮，使用佐剂将溶液乳化后注射进入动物体内进行免疫。 包含体的形成分析原因之一在于表达量过高，表达产物来不及折叠为活性形式—多数以高表达见长的蛋白表达系统都会得到包含体产物。如果融合蛋白表达含有标签，常用的做法是将包涵体用尿素溶解后在变性的情况下进行纯化，然后复性。但是，在溶解之前应该还要确定一下，蛋白是确实不可溶还是细胞裂解不完全。利用相差显微镜或者染色后对细胞裂解物进行观察，如果仍可以看到完整的细胞或者裂解后的沉淀和之前收集细胞沉淀大小相似，则可能意味着细胞没有被彻底裂解而导致检测不到产物。如果形成了包涵体，在比较高倍的（>400×）光镜下可以观察到大肠杆菌中有致密的结构。因为包涵体可能会占据细胞一半体积。 如果希望得到能行使功能的蛋白，蛋白应该以可溶形式表达。避免包涵体形成的方法很多，比如：选用表达量不高的蛋白表达系统，选择有助于可溶性表达的融合蛋白表达系统等，使用基本培养基等也有助于可溶性表达。另外一个容易忽视的问题是大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成，同样容易导致表达产物不溶，更换菌株有助于解决这个问题。 |
2楼2011-03-16 09:44:33
3楼2011-03-16 09:45:58
5楼2014-06-12 19:35:03
