| 查看: 3349 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助】包涵体表达与可溶性表达
|
|||
| 请大家说一下可溶性表达比包涵体表达的优势有哪些？谢谢，最好全面一些哈~ |
回复此楼» 猜你喜欢
211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习
已经有7人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
求调剂，总分315，考的生物医药，一志愿湖南师范大学。调剂到任何专业都可以
已经有3人回复
-
材料专硕306英一数二
已经有7人回复
-
材料工程专硕274一志愿211求调剂
已经有6人回复
-
一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂
已经有4人回复
-
332求调剂
已经有5人回复
-
271求调剂
已经有14人回复
-
275求调剂
已经有4人回复
-
302求调剂
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌BL21表达包涵体的问题
已经有8人回复
- 如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体
已经有19人回复
- 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
已经有17人回复
- 关于重组蛋白包涵体的溶解及复性
已经有5人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- 融合表达蛋白酶的表达
已经有26人回复
- 蛋白表达量的提高
已经有24人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 可溶性蛋白和包涵体
已经有3人回复
- 【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
已经有17人回复
- 包涵体变性复性
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
电力全国重点实验室双一流A类长江学者团队招2026年全日制博士1名（4月3日截止）
+2/116
-
有没有在香港的虫友啊
+1/89
-
浙江农林大学招收调剂
+1/81
-
湘潭大学化工学院国家级人才团队2026年博士研究生招生
+1/75
-
广东工业大学管理科学与工程专业博士招生
+1/34
-
南开大学罗景山教授课题组招聘博士后（光/电催化、钙钛矿光伏方向）
+2/34
-
重庆文理学院化学与环境工程学院 2026 届硕士研究生调剂通知
+1/19
-
国家级领军人才团队高分子材料方向2026年博士研究生招生
+1/16
-
211/双一流石河子大学化学化工学院--电催化，CO2转化
+1/16
-
学术/专业硕士调剂——化学、资源与环境
+1/15
-
北京某研究院生物化学与分子生物学相关专业申请考核制博士招生（春季）
+1/15
-
211/双一流石河子大学化学化工学院-电催化，单原子催化，CO2转化
+1/14
-
【第三轮招生，31号截止】澳科大诚招2026秋全奖博士研究生（纳米医学/生物材料方向）
+1/6
-
2026考研的同学，分数不够？想调剂上岸的同学，来看
+1/6
-
上海第二工业大学-朱大海课题组招生（过线就能调剂）
+1/5
-
课题组招收环境及相关专业调剂硕士研究生（欢迎优秀学生加入）
+1/2
-
加拿大阿尔伯塔大学招收电磁、无线通信、机器学习方向全奖硕士/博士/博士后/访问学者
+2/2
-
【2026年春季补录】厦门大学田中群院士/易骏教授纳米光子学团队招收2026年入学博士生
+1/2
-
招收化工类、环工类等相关专业研究生，要求过A类国家线
+1/2
-
药学专硕一志愿苏大本科苏大寻求B区高校调剂名额
+1/1
7楼2016-03-07 13:57:17
★ ★
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11
老实人sdu3375(金币+5): 2011-03-16 19:02:38
qinhy(金币+2): 说的很多，多给2个金币奖励下~~欢迎常来~~ 2011-03-16 19:48:11
|
许多外源蛋白在大肠杆菌蛋白表达系统中表达后都是以包涵体形式存在，包涵体是一种致密、不可溶的颗粒。一般情况下，形成包涵体表达产率都很高，并且容易分离得到比较纯的包含体。包涵体致密的结构有助于防止蛋白酶对它的降解作用，如果毒性较强的蛋白形成包涵体也就不会对细胞产生太大的损伤。如果做蛋白表达的目的是为了作为抗原制备抗体，那么出现包涵体也可以，可以用PBS将包涵体悬浮，使用佐剂将溶液乳化后注射进入动物体内进行免疫。 包含体的形成分析原因之一在于表达量过高，表达产物来不及折叠为活性形式—多数以高表达见长的蛋白表达系统都会得到包含体产物。如果融合蛋白表达含有标签，常用的做法是将包涵体用尿素溶解后在变性的情况下进行纯化，然后复性。但是，在溶解之前应该还要确定一下，蛋白是确实不可溶还是细胞裂解不完全。利用相差显微镜或者染色后对细胞裂解物进行观察，如果仍可以看到完整的细胞或者裂解后的沉淀和之前收集细胞沉淀大小相似，则可能意味着细胞没有被彻底裂解而导致检测不到产物。如果形成了包涵体，在比较高倍的（>400×）光镜下可以观察到大肠杆菌中有致密的结构。因为包涵体可能会占据细胞一半体积。 如果希望得到能行使功能的蛋白，蛋白应该以可溶形式表达。避免包涵体形成的方法很多，比如：选用表达量不高的蛋白表达系统，选择有助于可溶性表达的融合蛋白表达系统等，使用基本培养基等也有助于可溶性表达。另外一个容易忽视的问题是大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成，同样容易导致表达产物不溶，更换菌株有助于解决这个问题。 |
2楼2011-03-16 09:44:33
3楼2011-03-16 09:45:58
4楼2011-03-16 19:03:01
