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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问如何计算某融合蛋白的分子量

如题，最近要将携带目的基因的pET29a转入BL21(DE3)表达目的蛋白，知道目的基因的序列，大概1kb大小；知道pET29a含有His Tag和S-Tag，但具体不清楚目的蛋白和哪个Tag融合的。想要计算表达出的蛋白的分子量。
现有如下疑问：
1，如何确认目的基因和哪个标签融合（在文献没有明确说明的情况下）
2，如何计算融合蛋白的大小

先在此谢过了~

[ Last edited by baby1_9253344 on 2011-2-25 at 11:25 ]
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1楼 2011-02-25 10:35:57
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★ ★
baby1_9253344(金币+1): 3Q 2011-02-25 10:51:37
dhd997(金币+3): good 2011-02-25 15:19:44
表达之前没有将质粒送去测序确认一下有没有发生点突变或者其他突变？

测序的话就知道跟哪个标签融合了，然后根据翻译过来的氨基酸计算理论分子量。
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2楼2011-02-25 10:39:45
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-25 10:39:45:
表达之前没有将质粒送去测序确认一下有没有发生点突变或者其他突变？

测序的话就知道跟哪个标签融合了，然后根据翻译过来的氨基酸计算理论分子量。

没有测序...只有测序这一个方法吗？
我从文献里看到目的基因片段是BamHI/NdeI酶切的，然后查了一下pET29a的序列，酶切位点那一段是这样的：
PETupstraim primer M69214-3 --- T7 promotor --- ...(省略中间的)... --- NdeI --- S Tag --- ... --- BamHI --- ... --- His Tag ---...  
是不是这样的话，S Tag应该酶切的时候被切掉了，所以只有His tag?
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3楼2011-02-25 10:48:56
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
测序，软件将ORF翻译成氨基酸序列计算分子量。
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5楼2011-02-25 20:31:12
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laoshu16

银虫 (小有名气)
测序呗 又快又准 然后软件计算分子量就ok了
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6楼2011-02-25 20:34:31
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baby1_92533444楼
2011-02-25 14:31   回复  
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-25 10:35:57: 如题，最近要将携带目的基因的pET29a转入BL21(DE3)表达目的蛋白，知道目的基因的序列，大概1kb大小；知道pET29a含有His Tag和S-Tag，但具体不清楚目的蛋白和哪个Tag融合的。想要计算表达出的蛋白的分子量。 现有 ...

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