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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 融合表达与非融合表达的选择
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lijh1234

木虫 (小有名气)

[求助] 融合表达与非融合表达的选择

做带RFP腺病毒的过表达基因。

我做的是动物实验，带RFP的目的是为了检测是否转入细胞内。最终检测蛋白的话，还是要用WB？

这个我是用融合表达好还是非融合表达好？

因为用融合表达的话，我怕会影响目的蛋白的活性，RFP分子量约27kDa，我的目的蛋白20kDa。而且该目的蛋白腺病毒过表达的文献比较少，只查到不带荧光的腺病毒过表达。
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1楼 2013-05-17 18:51:49
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lijh1234

木虫 (小有名气)
非融合表达有什么缺点呢？
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2楼2013-05-17 18:52:19
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lijh1234

木虫 (小有名气)
有些人说非融合表达的话，检测会麻烦些。是不是指的是融合表达可以根据荧光来判断目的蛋白的表达量和表达部位？
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3楼2013-05-17 20:23:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by lijh1234 at 2013-05-17 20:23:53
有些人说非融合表达的话，检测会麻烦些。是不是指的是融合表达可以根据荧光来判断目的蛋白的表达量和表达部位？

可以这么理解。融合了荧光蛋白可以对目的蛋白的定位很方便。而且，这些荧光蛋白通常有commercial的抗体，可以用于WB。当然如果你已经有目的蛋白的抗体了就不用买RFP的抗体做WB了。但是有一点需要注意的是，尽管融合荧光蛋白通常不会影响目的蛋白的活性，你需要用实验验证。
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4楼2013-05-18 06:13:53
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