24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3324  |  回复: 6

herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子量13KDa的蛋白的转膜条件? 已有2人参与

最近在做一个分子量13KDa的小分子蛋白,每次都在转膜的一步出问题(胶是12%的、样品做其他的蛋白也做出来了)。跑完胶后MARKER还完整漂亮的在胶上,转膜完后就只能见到前面的大分子的MARKER了。小分子10KDa的MARKER就不见了,然后立春红染色膜上15KDa以下的蛋白条带都看不见。考染胶上15KDa以下的蛋白条带也看不见了。转膜的条件试过如下几种都失败了:1、350mA 1h;2、200mA  1h;3、200mA 45min;4、75mA 70min;5、350mA 45min;以上的转膜条件有参考其他老师做小分子条件的,有在此基础上修改了一下的,也有参考文献的,都失败了。同样都是10KDa marker转不上,染色后蛋白也看不见。因为担心立春红敏感度不够好,我也做到用ECL扫膜,但是最后也是没有条带的。请大家帮忙想想办法吧,谢谢了!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
herjasmine(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香 2013-07-29 22:39:36
确定mark转到膜上,如果真像你说的话(小蛋白全转过去),那么很有可能你的蛋白穿过膜了已经!
一般我们15kDa 大的蛋白,跑100 V, 1 h,没有问题!Good luck!
互助互励,共奋共进!!
2楼2013-07-29 21:58:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

herjasmine

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-29 21:58:27
确定mark转到膜上,如果真像你说的话(小蛋白全转过去),那么很有可能你的蛋白穿过膜了已经!
一般我们15kDa 大的蛋白,跑100 V, 1 h,没有问题!Good luck!

谢谢你,我试试看吧。
3楼2013-08-01 18:02:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxinhan123

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
30mA 30min就够了
4楼2013-08-01 18:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxinhan123

银虫 (正式写手)

错了,是300mA 30min
5楼2013-08-01 18:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋蛋mdt

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主最后出来了么,我要做S100A9蛋白,大小13KD,也是在转膜出问题了
6楼2016-01-07 22:17:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我丑我温柔

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

90v1h 转膜液用甘氨酸14.4的那个配方,别加sds甲醇20%注意不要有气泡

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-01-14 23:11:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 herjasmine 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268分085602化学工程调剂 +22 月照花林。 2026-04-09 22/1100 2026-04-10 00:29 by 孙小小12457
[考研] 一志愿211电子信息347求调剂 +3 554916 2026-04-03 4/200 2026-04-09 22:24 by 554916
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 080100力学316求调剂 +4 L_Hairui 2026-04-07 4/200 2026-04-09 21:17 by wutongshun
[考研] 286求调剂 +6 草木不言 2026-04-04 6/300 2026-04-09 21:06 by 286640313
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 296求调剂 +5 汪!?! 2026-04-09 5/250 2026-04-09 17:47 by 柠檬不酸zy
[考研] 求调剂 +7 chenxrlkx 2026-04-05 9/450 2026-04-09 09:04 by wj165256
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-04 15/750 2026-04-08 22:52 by 猪会飞
[考研] 一志愿吉大化学327求调剂 +12 王王白石 2026-04-06 13/650 2026-04-08 16:05 by luoyongfeng
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 285求调剂 +15 哦呦呼o 2026-04-04 17/850 2026-04-06 23:02 by chenzhimin
[考研] 287分求调剂 有专利国奖一志愿哈工大085406 +6 白易辰 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:46 by 875465
[硕博家园] 0856材料化工求调剂,一志愿211,初试成绩349 +4 江淮北月 2026-04-05 4/200 2026-04-06 22:44 by chenzhimin
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程,初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 材料调剂 +13 一样YWY 2026-04-03 14/700 2026-04-05 18:20 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂 +4 压力??大 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:36 by 啵啵啵0119
[考研] 本科985,专业0812分336求调剂 +4 莫莫很行 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:31 by zhq0425
信息提示
请填处理意见