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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western实验中大分子量的蛋白如何鉴定
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415849841

银虫 (小有名气)

[求助] western实验中大分子量的蛋白如何鉴定

实验中有两个蛋白分子量分别是220kd和180kd，用β-actin做内参，配置8%的分离胶，但是从没有测出过这两个蛋白的表达，是不是内参和分离胶的浓度选错了，请高手指点一下，不胜感激。
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1楼 2013-04-21 13:09:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-22 08:51:10
如果胶浓度不合适，只是分不开蛋白，不会检测不到。我觉得8%的胶应该是可以的。你确定样品中目标蛋白的量在western的检测限以上吗？
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2楼2013-04-22 01:16:18
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415849841

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-22 01:16:18
如果胶浓度不合适，只是分不开蛋白，不会检测不到。我觉得8%的胶应该是可以的。你确定样品中目标蛋白的量在western的检测限以上吗？

应该是吧，我们上样一般都在100微克，细胞都在50微克，不知道什么原因导致这样的问题出现

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-04-23 00:40:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 415849841 at 2013-04-23 00:40:41
应该是吧，我们上样一般都在100微克，细胞都在50微克，不知道什么原因导致这样的问题出现
...

根据你说的上样量，可以考染看看带型。内参的western做出来了吧？
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4楼2013-04-23 01:48:20
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415849841

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 01:48:20
根据你说的上样量，可以考染看看带型。内参的western做出来了吧？...

做出来了。你是说不转膜直接用考马斯亮蓝漂染，看出了哪些条带是吗？
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5楼2013-04-23 12:36:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 415849841 at 2013-04-23 12:36:23
做出来了。你是说不转膜直接用考马斯亮蓝漂染，看出了哪些条带是吗？...

是的，直接染胶就行了。虽然转过膜液可以用考马斯亮蓝染色看转膜的效果。你可以看一下目标蛋白分子量范围的条带情况。
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6楼2013-04-23 14:27:00
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