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herjasmine

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[求助] 分子量13KDa的蛋白的转膜条件？已有2人参与

最近在做一个分子量13KDa的小分子蛋白，每次都在转膜的一步出问题（胶是12%的、样品做其他的蛋白也做出来了）。跑完胶后MARKER还完整漂亮的在胶上，转膜完后就只能见到前面的大分子的MARKER了。小分子10KDa的MARKER就不见了，然后立春红染色膜上15KDa以下的蛋白条带都看不见。考染胶上15KDa以下的蛋白条带也看不见了。转膜的条件试过如下几种都失败了：1、350mA 1h；2、200mA 1h；3、200mA 45min；4、75mA 70min;5、350mA 45min;以上的转膜条件有参考其他老师做小分子条件的，有在此基础上修改了一下的，也有参考文献的，都失败了。同样都是10KDa marker转不上，染色后蛋白也看不见。因为担心立春红敏感度不够好，我也做到用ECL扫膜，但是最后也是没有条带的。请大家帮忙想想办法吧，谢谢了！

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1楼 2013-07-29 20:57:27

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Sthunder

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【答案】应助回帖

★
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herjasmine(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香 2013-07-29 22:39:36

确定mark转到膜上，如果真像你说的话（小蛋白全转过去），那么很有可能你的蛋白穿过膜了已经！
一般我们15kDa 大的蛋白，跑100 V， 1 h，没有问题！Good luck！

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互助互励，共奋共进！！

2楼2013-07-29 21:58:27

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-29 21:58:27
确定mark转到膜上，如果真像你说的话（小蛋白全转过去），那么很有可能你的蛋白穿过膜了已经！
一般我们15kDa 大的蛋白，跑100 V， 1 h，没有问题！Good luck！

谢谢你，我试试看吧。