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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 分子量接近，电荷接近的蛋白质怎么分离开来？
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

[求助] 分子量接近，电荷接近的蛋白质怎么分离开来？已有4人参与

分子量接近，电荷接近的蛋白质怎么分离开来？求各位大侠指教啊
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1楼2014-05-27 16:30:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑长胶，越长越好

双向电泳
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天行健
2楼2014-05-27 17:03:58
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younghe

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
笑笑打dota: 金币+5, ★有帮助 2014-10-11 17:08:58
纯化么，可以用疏水柱子，两个蛋白的疏水性应该不一样，可以试试，有时候PI相近的蛋白液可以在离子交换上面分开来，因为局部电荷分布不一样。
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3楼2014-05-29 10:34:52
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by younghe at 2014-05-29 10:34:52
纯化么，可以用疏水柱子，两个蛋白的疏水性应该不一样，可以试试，有时候PI相近的蛋白液可以在离子交换上面分开来，因为局部电荷分布不一样。

先用DEAE离子交换层析，跑出一个有活性的峰，收集酶液跑RsourceQ离子交换层析有两个相近的有活性的峰，再收集跑superdex 200又是一个有活性的大峰，然后不知道怎么分离了
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4楼2014-05-29 10:54:49
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-05-27 17:03:58
跑长胶，越长越好

双向电泳

你的意思是，利用他们电荷和分子量的细微差别，跑长距离胶将他们分离开来？
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5楼2014-05-29 10:59:37
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younghe

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by younghe at 2014-05-29 10:34:52
纯化么，可以用疏水柱子，两个蛋白的疏水性应该不一样，可以试试，有时候PI相近的蛋白液可以在离子交换上面分开来，因为局部电荷分布不一样。

是同一个蛋白的降解片段么？
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6楼2014-05-29 11:08:07
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by 笑笑打dota at 2014-05-29 10:59:37
你的意思是，利用他们电荷和分子量的细微差别，跑长距离胶将他们分离开来？...

是的，利用差别。双向电泳是最实用最有效的分立方式
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天行健
7楼2014-05-29 11:20:13
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
但是双向电泳胶的回收比较麻烦。你可以试试沉淀法。用不同浓度的盐溶液进行沉淀。或者用疏水层析。
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8楼2014-05-29 17:22:56
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by younghe at 2014-05-29 11:08:07
是同一个蛋白的降解片段么？...

是纯化之后不确定到底是纯化得到两种酶，还是一种双功能酶
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9楼2014-05-30 10:03:28
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-05-29 11:20:13
是的，利用差别。双向电泳是最实用最有效的分立方式...

恩，好的，谢谢
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10楼2014-05-30 10:04:01
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