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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

[求助] 分子量接近,电荷接近的蛋白质怎么分离开来? 已有4人参与

分子量接近,电荷接近的蛋白质怎么分离开来?求各位大侠指教啊
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑长胶,越长越好

双向电泳
天行健
2楼2014-05-27 17:03:58
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普通回帖

younghe

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
笑笑打dota: 金币+5, 有帮助 2014-10-11 17:08:58
纯化么,可以用疏水柱子,两个蛋白的疏水性应该不一样,可以试试,有时候PI相近的蛋白液可以在离子交换上面分开来,因为局部电荷分布不一样。
3楼2014-05-29 10:34:52
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by younghe at 2014-05-29 10:34:52
纯化么,可以用疏水柱子,两个蛋白的疏水性应该不一样,可以试试,有时候PI相近的蛋白液可以在离子交换上面分开来,因为局部电荷分布不一样。

先用DEAE离子交换层析,跑出一个有活性的峰,收集酶液跑RsourceQ离子交换层析有两个相近的有活性的峰,再收集跑superdex 200又是一个有活性的大峰,然后不知道怎么分离了
4楼2014-05-29 10:54:49
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-05-27 17:03:58
跑长胶,越长越好

双向电泳

你的意思是,利用他们电荷和分子量的细微差别,跑长距离胶将他们分离开来?
5楼2014-05-29 10:59:37
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younghe

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by younghe at 2014-05-29 10:34:52
纯化么,可以用疏水柱子,两个蛋白的疏水性应该不一样,可以试试,有时候PI相近的蛋白液可以在离子交换上面分开来,因为局部电荷分布不一样。

是同一个蛋白的降解片段么?
6楼2014-05-29 11:08:07
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by 笑笑打dota at 2014-05-29 10:59:37
你的意思是,利用他们电荷和分子量的细微差别,跑长距离胶将他们分离开来?...

是的,利用差别。双向电泳是最实用最有效的分立方式
天行健
7楼2014-05-29 11:20:13
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
但是双向电泳胶的回收比较麻烦。你可以试试沉淀法。用不同浓度的盐溶液进行沉淀。或者用疏水层析。
8楼2014-05-29 17:22:56
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by younghe at 2014-05-29 11:08:07
是同一个蛋白的降解片段么?...

是纯化之后不确定到底是纯化得到两种酶,还是一种双功能酶
9楼2014-05-30 10:03:28
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笑笑打dota

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-05-29 11:20:13
是的,利用差别。双向电泳是最实用最有效的分立方式...

恩,好的,谢谢
10楼2014-05-30 10:04:01
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