| 查看: 2012 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
samqueenw银虫 (初入文坛)
|
[求助]
融合蛋白表达只出现前半部分蛋白条带 已有4人参与
|
||
|
最近做融合蛋白，pet21a做载体，融合21kd和28kd的蛋白 构建后的载体经测序没有问题，前边21KD蛋白的终止密码子已经被去除，但是表达诱导后SDS凝胶电泳只在21KD的位置有表达条带（表达条件：37度；分别试了OD600=0.5,0.7,1.0; IPTG终浓度为0.3,0.5,1.0mM；诱导1h，3h，过夜。最后发现只要诱导过夜，就会有出现表达条带） 请各位做过融合蛋白的高手赐教啊  |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有106人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白异源表达，条带大小不对啊
已经有12人回复
- 蛋白表达不出来，是什么原因造成的
已经有7人回复
- 求助关于融合蛋白的linker连接问题
已经有10人回复
- 融合表达蛋白酶的表达
已经有26人回复
- 蛋白表达不出来是怎么回事？
已经有12人回复
- 请问pET30b这个载体在IPTG诱导后有没有可能表达除了目的蛋白以外的其他蛋白？
已经有16人回复
- 求助！关于GST融合蛋白纯化！楼主愁得一夜没有睡好！
已经有20人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀
已经有10人回复
- 共表达载体只表达出一个蛋白
已经有21人回复
- gst标签蛋白的表达和纯化
已经有17人回复
- 融合蛋白的linker怎么设计
已经有14人回复
- 蛋白电泳 时间变短 条带异常
已经有18人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 辣根过氧化物酶（HRP）能与其他蛋白融合表达吗？？
已经有4人回复
- 融合蛋白在大肠杆菌中的表达，怎么被我越做越复杂了？
已经有8人回复
- 毕赤酵母怎么表达不出融合蛋白？
已经有14人回复
- 【求助/交流】请问如何计算某融合蛋白的分子量
已经有5人回复
- 【求助/交流】重组蛋白融合标签的选择
已经有6人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？
已经有28人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白活性低？
已经有10人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
samqueenw(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-12-20 15:26:26
samqueenw(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-12-20 15:26:26
|
楼主这种情况我也遇到过,以下是我的经验,希望对你能有帮助: 我有一个蛋白怎么表达都不溶,没有办法了只好做了个融合蛋白,N端的是可溶的标签蛋白 但是IPTG诱导表达的结果是只看到了对应于融合的N端的可溶标签蛋白有很强诱导条带, 融合蛋白的全长条带很弱或者几乎看不到. 用N端his-tag做纯化可以拿到混合物,其中对应于前半部分的条带明显比对应于融合蛋白全长的条带要深 我把全长融合蛋白用HPLC分离出来, 然后用酶把融合蛋白从中间切开,结果后半部分就全部都沉淀了,上清夜里只有前半部分 我推测是因为融合蛋白的后半部分本身不能正确折叠, 所以e.coli.的某种机制就会倾向于把折叠和溶解度特别好的前半部分切下来. 而且对于融合蛋白来说, 两个融合部分的连接处本来也没有结构,也容易被各种蛋白酶非特异性地切开 |
6楼2013-12-20 03:42:31
chlorella409
木虫 (正式写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
4楼2013-12-13 08:41:07
samqueenw
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 297
- 散金: 50
- 帖子: 25
- 在线: 41.8小时
- 虫号: 2466403
- 注册: 2013-05-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2013-12-19 21:24:08
7楼2013-12-20 09:44:24
100