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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RT-PCR电泳呈现弥散状
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熙玥

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助/交流】RT-PCR电泳呈现弥散状

最近做的RT-PCR总是有很多问题，内参条带很亮，但是用设计的引物跑出来就呈弥散状，不明白是什么原因，一直做不出来，都快崩溃了。
（大家帮帮忙很急啊）
【求助/交流】RT-PCR电泳呈现弥散状
2013.10.16 1-1.jpg
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1楼 2013-10-31 10:41:00
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xufeng198

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

提高一下退货温度看看
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2楼2013-11-04 19:05:41
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N323

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-21 08:54:50
内参很亮，且没问题的话，可以排除你的cDNA是没问题的，同时可以验证你用的PCR试剂和PCR仪等正常，只有你的引物可能出现问题，大概有200-2000都有，所以建议你先提高温度，或做个梯度PCR，若不行的话就可能是引物特异性不好，需要重新设计引物，然后再验证！
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学无止境
3楼2013-11-13 08:40:00
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-21 08:54:54
首先，单从图上说，你的样品浓度太高，所以条带很亮但是分辨率低，没分开，建议你用1/20的上样浓度跑了试试；从技术上来说，你的PCR条件需要改进，退火温度，时间等参数要调整。你先试试看，引物应该没设么问题。
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4楼2013-11-13 10:41:38
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
你这个是定量PCR的产物吗？
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5楼2013-11-13 11:18:21
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熙玥

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-11-13 11:18:21
你这个是定量PCR的产物吗？

不是，只是单纯的克隆
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6楼2013-11-20 18:17:24
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