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熙玥

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助/交流】RT-PCR电泳呈现弥散状

最近做的RT-PCR总是有很多问题,内参条带很亮,但是用设计的引物跑出来就呈弥散状,不明白是什么原因,一直做不出来,都快崩溃了。
(大家帮帮忙很急啊)
【求助/交流】RT-PCR电泳呈现弥散状
2013.10.16 1-1.jpg
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xufeng198

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

提高一下退货温度看看
2楼2013-11-04 19:05:41
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N323

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-21 08:54:50
内参很亮,且没问题的话,可以排除你的cDNA是没问题的,同时可以验证你用的PCR试剂和PCR仪等正常,只有你的引物可能出现问题,大概有200-2000都有,所以建议你先提高温度,或做个梯度PCR,若不行的话就可能是引物特异性不好,需要重新设计引物,然后再验证!
学无止境
3楼2013-11-13 08:40:00
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-21 08:54:54
首先,单从图上说,你的样品浓度太高,所以条带很亮但是分辨率低,没分开,建议你用1/20的上样浓度跑了试试;从技术上来说,你的PCR条件需要改进,退火温度,时间等参数要调整。你先试试看,引物应该没设么问题。
4楼2013-11-13 10:41:38
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

你这个是定量PCR的产物吗?
5楼2013-11-13 11:18:21
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熙玥

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-11-13 11:18:21
你这个是定量PCR的产物吗?

不是,只是单纯的克隆
6楼2013-11-20 18:17:24
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