24小时热门版块排行榜

返回列表

马龙sweeting

木虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 2102.1
帖子: 506
在线: 55.5小时
虫号: 1319416

[交流] RT-PCR时GAPDH条带不一样，目的条带呈涂抹的模糊带如何改进~~

最近在做RT-PCR，可是总是发现GAPDH跑出来不一样~~有时候跑得更是一个有一个没有，请问这是怎么回事~~如何改进呢~~
还有我的目的条带总是出现涂抹状的模糊带，看上去有东西，但是不知道如何改进才行~~请各位高手帮帮忙~~谢谢~~

回复此楼

» 猜你喜欢

博士去二本高校当辅导员，如何调整心态？已经有10人回复
面上有专家说实验设备不是我们单位的已经有6人回复
27细胞生物学申博已经有5人回复
江苏省自然基金什么时候出结果已经有6人回复
广西大学-广州大学招聘博士后欢迎广大优秀人才！！！已经有11人回复
闲聊已经有3人回复
如何查询2026年获批项目名称？已经有3人回复
两块石头已经有10人回复
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急已经有15人回复
面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数已经有13人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来已经有14人回复
RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~ 已经有7人回复
RT-PCR跑出来的条带没有量效关系怎么办？什么原因已经有3人回复
提RNA反转录后，用GAPDH和TLR进行PCR，可是GAPDH条带很亮，TLR怎么都出不来已经有14人回复
【求助/交流】RT-PCR总是得不到目的条带已经有12人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2012-09-07 11:12:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖置顶 ( 共有2个 )

geek23

木虫 (小有名气)

BioEPI: 3
应助: 9 (幼儿园)
金币: 3680.8
帖子: 277
在线: 212.4小时
虫号: 1042788

★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与

建议楼主详述PCR 条件,最好附个结果图啥的~

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2012-09-07 16:07:33

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

BioEPI: 1
应助: 107 (高中生)
金币: 6525.2
帖子: 842
在线: 413.7小时
虫号: 859607

★ ★ ★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+2, 回答地很详细 2012-09-09 07:36:08

RT-PCR影响因素多了，最主要的还是原料-RNA质量要好，包括浓度以及完整性，这个最好通过RNA变性胶结合OD260/OD280判断；其次操作过程中的试剂质量要有保障，主要是反转酶以及聚合酶；再次实验过程中的个人操作规范问题，例如移液器加样准确否，有时候打完液体后靠一下EP管壁有时候不靠可能就会产生误差，有时候tip里面的液体打不干净影响更大；最后还是仪器的稳定性，特别是控温等；当然还有很关键的就是引物特异性问题等。总之RT-PCR的影响因素很多，出了问题要一个一个的回查。

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2012-09-08 10:09:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖