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铜虫 (小有名气)

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[求助] 求解：纯化蛋白跑SDS-PAGE，没有条带已有1人参与

各位大神，小妹现在遇到一大难题。
我有一株野生菌产我要的酶，发酵后我对粗酶液进行了盐析和透析，然后过了强阴离子柱，再把洗脱的蛋白冻干后用tris复溶，浓度大约300微克/毫升。之后就想做一个SDS-PAGE看看蛋白纯不纯，还有它的分子量。
分离胶和浓缩胶分别是12%和5%，但是就是没有条带，可是Marker是有条带的。不知道是什么原因，跪求各位能够解答！！！！！！！

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1楼 2013-10-04 19:17:51

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引用回帖:

3楼: Originally posted by lmqml24 at 2013-10-04 23:49:43
纯化的每一步都应该用SDS－PAGE检测下的，这样既能判断纯化的效果，又能对目标条带进行跟踪。另外，透析时间较长，酶易失活。不知楼主是否对该酶的特性已知，盐析沉淀的浓度大的话，可以考虑疏水交换层析；浓度小的 ...

我是用60％-80％硫酸铵盐析的，透析后的样品是有酶活的，而且过完离子交换柱的样品也是有酶活的。不知道问题到底出在哪里，就是没有条带

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