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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求解：纯化蛋白跑SDS-PAGE，没有条带
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715097730

铜虫 (小有名气)

[求助] 求解：纯化蛋白跑SDS-PAGE，没有条带 已有1人参与

各位大神，小妹现在遇到一大难题。
我有一株野生菌产我要的酶，发酵后我对粗酶液进行了盐析和透析，然后过了强阴离子柱，再把洗脱的蛋白冻干后用tris复溶，浓度大约300微克/毫升。之后就想做一个SDS-PAGE看看蛋白纯不纯，还有它的分子量。
分离胶和浓缩胶分别是12%和5%，但是就是没有条带，可是Marker是有条带的。不知道是什么原因，跪求各位能够解答！！！！！！！
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1楼 2013-10-04 19:17:51
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715097730

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-04 22:21:41
你通过什么方法检测你要的酶，测酶活吗？你可以分别监测纯化前的粗酶液、纯化过程中的各个组分的酶活，确定酶是否在纯化过程中丢失或者失活。

每个过程都有测酶活的，蛋白不会完全丢失

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-10-05 11:56:03
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715097730

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lmqml24 at 2013-10-04 23:49:43
纯化的每一步都应该用SDS－PAGE检测下的，这样既能判断纯化的效果，又能对目标条带进行跟踪。另外，透析时间较长，酶易失活。不知楼主是否对该酶的特性已知，盐析沉淀的浓度大的话，可以考虑疏水交换层析；浓度小的 ...

我是用60％-80％硫酸铵盐析的，透析后的样品是有酶活的，而且过完离子交换柱的样品也是有酶活的。不知道问题到底出在哪里，就是没有条带

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-10-05 12:03:07
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715097730

铜虫 (小有名气)
多谢各位，已经做出来了，还是样品浓度太低，我把样品加过lodding后煮沸浓缩了再跑就有条带了
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11楼2013-10-11 15:44:01
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