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草本凝香

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助!切胶回收蛋白的方法

求助各位一个关于蛋白质纯化方面的问题:我现在想从PAGE胶上切胶纯化我的目的蛋白(可溶性的,大小约有17kD),纯化后要做质谱分析。因为时间和经济条件有限,能给介绍些利用切胶回收纯化蛋白质的方法吗?谢谢,谢谢
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

草本凝香(金币+1): 谢谢您的帮助~还想请您帮个忙:请您推荐几个您用的或知道的效果比较好的,也不是很贵的试剂盒吧。谢谢 2011-05-17 15:22:18
你查一下试剂盒,应该有试剂盒可以做,做蛋白肯定要投入些的,不然也做不好的。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
2楼2011-05-16 18:28:19
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

那你问一问国内的公司看看,不知道国内的公司这方面的盒子有没有,现在咱国内蛋白质做的还是比较落后的,因为需要的投入太大了。国内的,你问问天根什么的,不知道会不会有,国内没有,你只能看国外的的,GE公司做蛋白的东西比较权威,我用的好多东西都是GE的,在看看英俊、罗氏什么的,多问问看吧。我没用够这样的盒子。你看能不能和蛋白质中心联系上,他们做的多。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
3楼2011-05-21 11:20:18
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草本凝香

铁虫 (初入文坛)

谢谢疯狂修行者的建议~经费方面我会和导师商量,还想再请教一下:您说的蛋白质中心指的是。。?关于蛋白纯化方面我是个新手,有很多不懂的地方,不知道我能咨询您所说的蛋白质中心吗? 谢谢您
4楼2011-05-24 21:18:14
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千king寻

铜虫 (初入文坛)

请问你已经回收了吗?你是怎么回收的啊?我最近准备蛋白胶回收做质谱,能不能分享一下你的方法?谢谢啦!
5楼2011-11-19 16:17:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

割胶,研磨碎,4度浸泡过夜,得率为20-30%。


不要想着用试剂盒,试剂盒的原理不会告诉你的,用来促进凝胶释放的如果是酶,就会污染你的蛋白质,你就白做了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-11-20 09:32:58
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quiller2000

木虫 (著名写手)

没有那么复杂,反正你不是自己打质谱,何不挖胶送公司呢?反正他们都是可以做的。
如果你的样品很多,电洗脱就可以了。
如果你们没有电洗脱,告诉你一个可行而且很方便的办法儿:用透析袋将你的胶装起来,封好,然后丢到电泳槽里面跑一会儿,蛋白质就到透析袋里面了;吸出透析袋里面的液体,冷冻干燥,然后送样!
致良知
7楼2011-11-20 10:00:55
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xhjggl

木虫 (正式写手)

PAGE胶上切胶纯化我的目的蛋白(可溶性的,大小约有17kD),纯化后要做质谱分析,可以切取目的条带送公司,上海生工就有此服务
8楼2011-11-20 16:59:47
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岚澜蓝天

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-11-20 10:00:55
没有那么复杂,反正你不是自己打质谱,何不挖胶送公司呢?反正他们都是可以做的。
如果你的样品很多,电洗脱就可以了。
如果你们没有电洗脱,告诉你一个可行而且很方便的办法儿:用透析袋将你的胶装起来,封好,然 ...

您好,请问一下电洗脱需要特定的仪器吗?可以直接用核酸电泳仪(即水平电泳仪)洗脱吗?洗脱条件为什么呢?可以麻烦您指导我一下Native PAGE蛋白回收的具体步骤吗?我的邮箱为1049122086@qq.com,期待您的回信,不甚感激。
9楼2018-11-26 17:02:56
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quiller2000

木虫 (著名写手)

有耗材,普通电泳仪就行

发自小木虫IOS客户端
致良知
10楼2018-11-28 18:53:39
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