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草本凝香

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助！切胶回收蛋白的方法

求助各位一个关于蛋白质纯化方面的问题：我现在想从PAGE胶上切胶纯化我的目的蛋白（可溶性的，大小约有17kD），纯化后要做质谱分析。因为时间和经济条件有限，能给介绍些利用切胶回收纯化蛋白质的方法吗？谢谢，谢谢
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1楼 2011-05-16 17:48:10
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

草本凝香(金币+1): 谢谢您的帮助~还想请您帮个忙：请您推荐几个您用的或知道的效果比较好的，也不是很贵的试剂盒吧。谢谢 2011-05-17 15:22:18
你查一下试剂盒，应该有试剂盒可以做，做蛋白肯定要投入些的，不然也做不好的。
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
2楼2011-05-16 18:28:19
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
那你问一问国内的公司看看，不知道国内的公司这方面的盒子有没有，现在咱国内蛋白质做的还是比较落后的，因为需要的投入太大了。国内的，你问问天根什么的，不知道会不会有，国内没有，你只能看国外的的，GE公司做蛋白的东西比较权威，我用的好多东西都是GE的，在看看英俊、罗氏什么的，多问问看吧。我没用够这样的盒子。你看能不能和蛋白质中心联系上，他们做的多。
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
3楼2011-05-21 11:20:18
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草本凝香

铁虫 (初入文坛)
谢谢疯狂修行者的建议~经费方面我会和导师商量，还想再请教一下：您说的蛋白质中心指的是。。？关于蛋白纯化方面我是个新手，有很多不懂的地方，不知道我能咨询您所说的蛋白质中心吗？ 谢谢您
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4楼2011-05-24 21:18:14
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千king寻

铜虫 (初入文坛)
请问你已经回收了吗？你是怎么回收的啊？我最近准备蛋白胶回收做质谱，能不能分享一下你的方法？谢谢啦！
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5楼2011-11-19 16:17:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
割胶，研磨碎，4度浸泡过夜，得率为20-30%。


不要想着用试剂盒，试剂盒的原理不会告诉你的，用来促进凝胶释放的如果是酶，就会污染你的蛋白质，你就白做了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-11-20 09:32:58
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quiller2000

木虫 (著名写手)
没有那么复杂，反正你不是自己打质谱，何不挖胶送公司呢？反正他们都是可以做的。
如果你的样品很多，电洗脱就可以了。
如果你们没有电洗脱，告诉你一个可行而且很方便的办法儿：用透析袋将你的胶装起来，封好，然后丢到电泳槽里面跑一会儿，蛋白质就到透析袋里面了；吸出透析袋里面的液体，冷冻干燥，然后送样！
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致良知
7楼2011-11-20 10:00:55
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xhjggl

木虫 (正式写手)
PAGE胶上切胶纯化我的目的蛋白（可溶性的，大小约有17kD），纯化后要做质谱分析,可以切取目的条带送公司，上海生工就有此服务
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8楼2011-11-20 16:59:47
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岚澜蓝天

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-11-20 10:00:55
没有那么复杂，反正你不是自己打质谱，何不挖胶送公司呢？反正他们都是可以做的。
如果你的样品很多，电洗脱就可以了。
如果你们没有电洗脱，告诉你一个可行而且很方便的办法儿：用透析袋将你的胶装起来，封好，然 ...

您好，请问一下电洗脱需要特定的仪器吗？可以直接用核酸电泳仪（即水平电泳仪）洗脱吗？洗脱条件为什么呢？可以麻烦您指导我一下Native PAGE蛋白回收的具体步骤吗？我的邮箱为1049122086@qq.com，期待您的回信，不甚感激。
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9楼2018-11-26 17:02:56
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quiller2000

木虫 (著名写手)
有耗材，普通电泳仪就行

发自小木虫IOS客户端
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致良知
10楼2018-11-28 18:53:39
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