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求助高手，我用手提的土壤DNA，用什么方法纯化
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| 我用手提的土壤总DNA，之前用过切胶回收，但是切胶回收的产物做PCR效果不好。用soilmaster DNA 纯化效果还不错，但是再买说已经停产了，不知道有没有其他好的纯化方法，求高手指教~~~ |
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yaoyl0679
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2楼2011-12-18 11:36:52
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amisking(应助指数-1): 2011-12-18 17:56:52
amisking:编辑内容 2011-12-18 17:57
amisking(应助指数-1): 2011-12-18 17:56:52
amisking:编辑内容 2011-12-18 17:57
 本帖仅楼主可见 |
3楼2011-12-18 12:21:21
4楼2011-12-18 20:46:03
【答案】应助回帖
★ ★ ★
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zhang8826857(金币+3): good 2011-12-19 09:49:23
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+3): good 2011-12-19 09:49:23
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方法我给你，我自己总结用电子天平分别称取土样各3g于磨口三角烧瓶内 用移液枪分别移取6mLDNA提取液加入到三角烧瓶内 从冰箱中取出蛋白酶K和溶菌酶放在手心焐热至溶化 用移液枪分别移取500uL和20uL溶菌酶和蛋白酶K于三角烧瓶内，然后塞上空心塞置于37℃恒温摇床上振荡30min，然后取出置于37℃恒温水浴锅内水浴1小时。 待水浴结束后分别加入1mL20%的SDS溶液，再将其置于65℃恒温水浴锅内水浴2小时 待水浴结束后，取出分别加入2.51mL的6mol/L的氯化钠溶液剧烈振荡，倒入离心管12000r/min离心15分钟 取上清液将其分成3分每份均取0.4mL置于灭过菌的离心管内，然后加入0.4mL的苯酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的溶液，然后12000r/min离心5分钟 离心后取上清液加入等体积的氯仿：异丙醇=24：1的溶液然后置于离心机12000r/min离心5分钟 取出上清液加入2倍提及的无水乙醇室温下沉淀20~30分钟 待沉淀完12000r/min离心10分钟 弃去上清液加入200uL的TE缓冲液使沉淀溶解 放置在-20℃冰箱保存出来的，效果还不错的！方法步骤如下： |
5楼2011-12-18 22:18:23
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jinpeng_6118
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