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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA纯化问题
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA纯化问题 已有14人参与

请问各位虫友，在进行酶切之后纯化回收DNA，只是简单的纯化，不需要切胶，你们都是怎么纯化的？用哪个试剂盒比较好呢？我现在遇到了纯化的问题，真是举步维艰啊！
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1楼 2010-11-26 09:05:25
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littlehong

木虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-26 09:44:19
酶切之后，一般要进行跑胶，把小片段跑掉，再切胶回收的。
如果楼主不跑胶，可以进行乙醇沉淀回收。
如果想用试剂盒的话，一般的溶胶回收试剂盒都可以用，不过要加入3倍体积的溶胶液，再正常回收。这样效率会挺好
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2楼2010-11-26 09:13:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要提出具体的问题才行~~
试剂盒大家用什么牌子的都有，而且只要不是太离谱的贱价试剂盒，都能做出来
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3楼2010-11-26 09:16:16
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
东盛公司的试剂盒 回收效率很高
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好好学习，天天向上
4楼2010-11-26 09:17:12
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-26 09:44:31
还是跑胶在做胶回收吧
跑胶的时候也能跑掉一些不必要的杂带和一些杂质
最后一胶回收，DNA的纯度就挺高的啦
不然代上一些小片段的DNA进行到下一步的实验，也是挺麻烦的。
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
5楼2010-11-26 09:22:11
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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流 2010-11-26 09:44:43
PCR产物酶切回收的话，一般直接用产物纯化试剂盒直接回收就的了，因为你的片段只有一条带，酶切只是切开两端的酶切位点和保护碱基；质粒酶切就不一样了，鉴于其不同存在类型，另外酶切有小片段，有时可能只切开一个位点等原因，一定要切胶回收。试剂盒的话，没啥关系，只是效率的问题，你的量足就行，而且片段大小不同回收也有不同。酶连的话如果不成功，一般都是质粒没有切好，重新切下就行了，经验之谈啊，见笑
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独YY不如众YY！！！
6楼2010-11-26 09:29:38
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢参与 2010-11-26 09:45:01
你是基因组酶切还是载体酶切？

基因组酶切后，用酚氯仿抽提1次，再氯仿一次，最后乙醇沉淀就好。

载体酶切，那就应该胶回收了。

不过也看你目的，一切都是要看你的实验目的而定。
核酸纯化，无非是有机试剂除蛋白，醇沉水提。过柱子就是硅胶吸附核酸，再水提。你根据你的目的选择吧。
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7楼2010-11-26 09:39:13
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xiongying88
★
silicare(金币-1):看清楚了，楼主的帖子是求助帖，求助帖是不允许纯表情回复的，改正错误后pm版主，返还你BB 2010-11-26 17:17:07
8楼2010-11-26 09:43:26
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切后如果是一条带就可以乙醇纯化啊
如果不是的话，只有切胶回收啊
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9楼2010-11-26 10:42:52
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waveking3236
★
silicare(金币-1):看清楚了，楼主的帖子是求助帖，求助帖是不允许纯表情回复的，改正错误后pm版主，返还你BB 2010-11-26 17:17:20
10楼2010-11-26 10:49:36
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