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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA纯化问题 已有14人参与

请问各位虫友,在进行酶切之后纯化回收DNA,只是简单的纯化,不需要切胶,你们都是怎么纯化的?用哪个试剂盒比较好呢?我现在遇到了纯化的问题,真是举步维艰啊!
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littlehong

木虫 (初入文坛)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-26 09:44:19
酶切之后,一般要进行跑胶,把小片段跑掉,再切胶回收的。
如果楼主不跑胶,可以进行乙醇沉淀回收。
如果想用试剂盒的话,一般的溶胶回收试剂盒都可以用,不过要加入3倍体积的溶胶液,再正常回收。这样效率会挺好
2楼2010-11-26 09:13:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要提出具体的问题才行~~
试剂盒大家用什么牌子的都有,而且只要不是太离谱的贱价试剂盒,都能做出来
3楼2010-11-26 09:16:16
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
东盛公司的试剂盒 回收效率很高
好好学习,天天向上
4楼2010-11-26 09:17:12
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-26 09:44:31
还是跑胶在做胶回收吧
跑胶的时候也能跑掉一些不必要的杂带和一些杂质
最后一胶回收,DNA的纯度就挺高的啦
不然代上一些小片段的DNA进行到下一步的实验,也是挺麻烦的。
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
5楼2010-11-26 09:22:11
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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟

★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢交流 2010-11-26 09:44:43
PCR产物酶切回收的话,一般直接用产物纯化试剂盒直接回收就的了,因为你的片段只有一条带,酶切只是切开两端的酶切位点和保护碱基;质粒酶切就不一样了,鉴于其不同存在类型,另外酶切有小片段,有时可能只切开一个位点等原因,一定要切胶回收。试剂盒的话,没啥关系,只是效率的问题,你的量足就行,而且片段大小不同回收也有不同。酶连的话如果不成功,一般都是质粒没有切好,重新切下就行了,经验之谈啊,见笑
独YY不如众YY!!!
6楼2010-11-26 09:29:38
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adslye

银虫 (正式写手)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢参与 2010-11-26 09:45:01
你是基因组酶切还是载体酶切?

基因组酶切后,用酚氯仿抽提1次,再氯仿一次,最后乙醇沉淀就好。

载体酶切,那就应该胶回收了。

不过也看你目的,一切都是要看你的实验目的而定。
核酸纯化,无非是有机试剂除蛋白,醇沉水提。过柱子就是硅胶吸附核酸,再水提。你根据你的目的选择吧。
7楼2010-11-26 09:39:13
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silicare(金币-1):看清楚了,楼主的帖子是求助帖,求助帖是不允许纯表情回复的,改正错误后pm版主,返还你BB 2010-11-26 17:17:07
8楼2010-11-26 09:43:26
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violet.zhou

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切后如果是一条带就可以乙醇纯化啊
如果不是的话,只有切胶回收啊
9楼2010-11-26 10:42:52
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silicare(金币-1):看清楚了,楼主的帖子是求助帖,求助帖是不允许纯表情回复的,改正错误后pm版主,返还你BB 2010-11-26 17:17:20
10楼2010-11-26 10:49:36
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