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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌（青霉）纯化问题
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Hannet

金虫 (正式写手)

[交流] 真菌（青霉）纯化问题 已有6人参与

我有一株真菌，通过ITS比对，是青霉，但在PDA生长很慢，而且只长孢子，所以纯化很麻烦，我纯得一株。接种菌块，在试管里培养得打孢子种子液，用孢子液涂布平板，长出来的菌落，在同一个平板上，开始都是一样的白色菌落，培养一段时间，原本一样的菌落表现出有不同的菌落特征，分别挑起不同菌落培养，提取DNA，扩ITS，测序比对，原来在同一块平板上的不同菌落菌，测序结果，比对后同源性很高，应该是同一株菌。
有没有人遇到这样类似的情况？
照片在下；
不同菌落照片改天补上；

补上两个不同菌落图片，两个菌ITS序列同源性很高95%，从20-510的碱基序列全部相同。





[ Last edited by Hannet on 2011-6-30 at 11:56 ]
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1楼 2011-06-29 21:51:52
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)
★
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真菌的分化程度很高的，培养条件 营养条件等都会对菌落形态和色素的产生有影响的。用孢子液稀释涂布的应该是纯菌吧！建议上图！
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2楼2011-06-30 07:22:05
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)
另外根据你的培养基的表型，感觉你用的是成品的PDA或者是用的土豆淀粉，根据我们的经验，好像利用土豆直接煮沸，过滤 配制出来的培养基更利于真菌生长。
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3楼2011-06-30 07:23:42
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Hannet

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by microxy at 2011-06-30 07:23:42:
另外根据你的培养基的表型，感觉你用的是成品的PDA或者是用的土豆淀粉，根据我们的经验，好像利用土豆直接煮沸，过滤 配制出来的培养基更利于真菌生长。

我们实验室也是用自己煮的土豆配制的PDA
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4楼2011-06-30 11:02:13
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长鑫

木虫 (正式写手)
★
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我貌似看过楼主列出的菌种的图片，不过据我个人的理解是这样的。基于你的ITS基因序列比对结果，应该可以说明菌种的同一性，只是可能在不同的条件下出现了产生色素的培养条件而出现了上面有红色素的产生。
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5楼2011-07-01 09:49:40
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笨笨达达

银虫 (小有名气)
★
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培养基有一点变化，真菌的表型都有可能不一样的
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6楼2011-08-11 18:30:41
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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楼主，你这三种菌落形态我都有，很可惜，它们是不同的菌。你也分析过ITS了，我认为如果是用同一种菌再分离得到的青霉，它们的ITS起码是99%相同，剩下的1%是测序产生的误差，也就是说应该是完全相同的。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-08-11 20:10:18
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Hannet

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-11 20:10:18:
楼主，你这三种菌落形态我都有，很可惜，它们是不同的菌。你也分析过ITS了，我认为如果是用同一种菌再分离得到的青霉，它们的ITS起码是99%相同，剩下的1%是测序产生的误差，也就是说应该是完全相同的。

哦，那我要怎么鉴别这三株菌是不是同一株菌呢？
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8楼2011-08-11 21:29:34
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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在同一种培养基的平板上形态不同，就表示各自基因间有差别，所以就不能称为同一株菌株。但是可能为同一种，因为分类学上种下面还有亚种和变种。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-08-12 01:22:09
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Hannet

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-12 01:22:09:
在同一种培养基的平板上形态不同，就表示各自基因间有差别，所以就不能称为同一株菌株。但是可能为同一种，因为分类学上种下面还有亚种和变种。

怪不得我测他们的ITS（500bp）几乎一样，那有没有什么分子手段区分鉴别他们？
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10楼2011-08-12 14:25:42
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