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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?
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jilabusha

木虫 (正式写手)

[求助] pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?

T-18载体连接了1500bp的目的片段后，我用 EcoR I  和 Spt I 双酶切进行鉴定，电泳图如下，能帮我分析下这个电泳图吗?有泳道出现了好多条带的?我想不明白
pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?
EcoR I  和 Spt I 双酶切鉴定.jpg
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天道酬勤
1楼 2013-08-07 08:50:41
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yhbletter

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jilabusha(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-08-08 10:34:21
1，请解释一下你泳道的顺序
2，请确定你的目的片段里面没有这两个酶切位点。
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2楼2013-08-07 10:20:14
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maidi12

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
jilabusha(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-08-08 10:34:28
本帖内容被屏蔽
3楼2013-08-07 10:42:20
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jilabusha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yhbletter at 2013-08-07 10:20:14
1，请解释一下你泳道的顺序
2，请确定你的目的片段里面没有这两个酶切位点。

不好意思  忘记补充了  这里Maker是DL5000的条带  依次是5000 3000 2000  1500  1000 750  500 250 200   第一泳道是Maker  后面的都是不同的转化子质粒 双酶切产物
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天道酬勤
4楼2013-08-07 17:54:28
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jilabusha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by maidi12 at 2013-08-07 10:42:20
18T载体上带有好多酶切位点，建议你先看一下你的片段里面有没有这些酶切位点，如果有应该要避开使用这些酶

我不确定我的目的片段（16S rDNA)里面有没有这两个酶切位点  我只知道目的片段2端的序列
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天道酬勤
5楼2013-08-07 17:56:27
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maidi12

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2013-08-07 23:43:22
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cookee1981

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-08 10:34:42
jilabusha: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2013-08-09 15:13:27
看你的电泳图，结果可能是这样的：你的酶切时间好像还不够充分吧，1-3号质粒没有插入目的片段，4号不管了，5-7号应该插入了目的片段，其中5号的酶切效果比较好，5-7号都可以送去测序。照图分析来说，你的目的片段在800bp左右包含了一个你所用的酶切位点，所以你的目的片段变成了800和600bp左右大小的两个小片段。一切还是以测序结果为准吧.
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7楼2013-08-08 08:46:39
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