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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET28a与目的基因连接后转化长满菌
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

[求助] pET28a与目的基因连接后转化长满菌

RT
用的BamHI和XhoI双切目的基因和pET28a转化涂布于KANA板上 过夜后 板上张了一层白色的东西 貌似是菌 但也不可能转化效率那么高啊 张满了 另外比较诡异的是 在那一层白色的东西上面还有几个单菌落，请问大神这是肿么回事？
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1楼 2013-01-13 14:26:36
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是你的ka抗性失效了，（如：倒平板时加ka时温度太高，ka浓度太低等）
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2楼2013-01-13 16:22:59
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-01-13 16:22:59
可能是你的ka抗性失效了，（如：倒平板时加ka时温度太高，ka浓度太低等）

没有 我特意试过KANA没有失效
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3楼2013-01-13 17:56:22
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hard_bull

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挑单克隆抽质粒电泳试一试，也就一晚上加一上午的时间，看看条带对不对。估计是长杂菌了
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没有做不出来的课题，只有没有思考的大脑
4楼2013-01-13 18:39:13
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灰血动物

金虫 (小有名气)
有可能就是电转效率太高，建议孵育后稀释涂布

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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未完成
5楼2013-01-14 00:49:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会感受态污染了？是否做了没加DNA的卡那板的负对照？
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6楼2013-01-14 03:15:13
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你涂了多少菌？一般我们都涂10，,90ul. 如果没出来，再把剩下的菌全图上
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shine
7楼2013-01-14 09:01:29
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-15 11:55:10
1.抗生素失效
2.质粒污染
3.感受态效率过高

解决方案建议
1.更换新配制的抗生素液体
2.检验质粒是否拿错或容器是否被其他质粒污染
3.。。。。。这个，你用卡娜抗性的质粒1ul快转看看能不能长，如果长了100个左右效率就还可以，这样的话那些小菌也许就是目的菌。至于那些大的菌姑且认为是污染吧。。。。

话说楼主这样的情况我只有在AMP抗性遇到过类似样的平板，卡娜的真心没啥奇怪平板啊。。。建议做转化的房间用紫外灯照照消毒一下
祝实验顺利
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8楼2013-01-15 10:35:07
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Renavatio

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
长一层白色的菌我也遇见过，不过我的是Tet抗性，我检测过  只有长出来的那种很明显的克隆才是阳性的，那一层我觉得是板上的抗生素部分失效或者是倒板的时候抗生素含量加少了
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Undefined！
9楼2013-01-15 20:38:27
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铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果你确定kana没问题的话，那一定是染菌了，看看你的超净台空气过滤装置是否完善，培养箱是否有其他菌种污染。
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10楼2013-03-04 21:31:12
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