应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 相对荧光定量cDNA的问题
51/1返回列表
查看: 1923  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

thinkerboy

铁虫 (小有名气)

[求助] 相对荧光定量cDNA的问题

求问坛子里的各位大神，我做相对荧光定量，首先提组织RNA，然后反转录成cDNA，以cDNA做模板做荧光定量，我主要做不同组织里的目的基因的相对表达量，请问我在提各个组织RNA，反转录后，要不要将各个组织反转录的cDNA测一下浓度，然后将各个组织的cDNA浓度稀释调整到相同的浓度，作为模板做荧光定量。也就是说我需要调整一下RNA浓度再反转录，或者是统一一下各个组织的cDNA浓度再作模板吗。

[ Last edited by thinkerboy on 2013-7-26 at 21:10 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-26 21:00:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

从你的实验要求来看 不需要 不同组织的相对表达主要还是看内参 多皆多 少皆少 都是呈比例关系的
赞一下 回复此楼
人物
9楼2013-09-27 17:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:22:44
本帖内容被屏蔽
2楼2013-07-27 11:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
thinkerboy(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-27 21:44:44
你描述的这个其实就是不同sample之间互相比较时 “均一化”的概念:normalization。
而qPCR常用的均一化手段就是通过一个被认为在不同组织中表达量恒定的基因作为标杆，即内参基因，比如actin。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-07-27 19:43:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
thinkerboy(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-07-27 21:44:51
没有实质性必要，因为你有内参。但在反转录之前一定要测总RNA浓度，防止浓度过高，反转录酶不足导致反转录不完全！ Good luck！
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
4楼2013-07-27 21:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭