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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时荧光定量的数据导出后怎么处理啊？
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昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 实时荧光定量的数据导出后怎么处理啊？

如题，我做的是比较CT，是新手，请多多指教，不甚感激！
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太阳出来，星星要走。
1楼 2011-12-08 18:23:10
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回帖置顶 ( 共有1个 )

见证2011

至尊木虫 (文坛精英)

莫名的忧伤

【答案】应助回帖

昺昺(金币+2): 谢谢 2011-12-08 19:41:30
1949stone(MolEPI+1): 要鼓励 2011-12-09 00:58:35
http://wenku.baidu.com/view/e109260302020740be1e9b2b.html  楼主可以下载相关文献，自己研究下！谢谢！希望对你有用！多多奖励关照新手！
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幸福是奋斗出来的！
3楼2011-12-08 19:13:55
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普通回帖

昺昺

木虫 (小有名气)
我做的一般是三个重复，重复性不太好，靶比较大，还请高手指点一二。
还有，判断一个基因的上调与否，使用什么样的标准？只要实验组的相对定量比对照组高就能说明是上调吗？还是说增加不超过一定范围就是没有变化？
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太阳出来，星星要走。
2楼2011-12-08 18:51:45
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昺昺

木虫 (小有名气)
请高手继续指教，谢谢
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太阳出来，星星要走。
4楼2011-12-08 19:42:38
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xubo7

木虫之王 (文坛精英)

小木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 很热心 2011-12-09 00:58:56
昺昺(金币+5): 2011-12-09 08:56:49
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2852616
看看这个，肯定会有所帮助！
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人的品德很重要！！！不能失去德行！！！
5楼2011-12-08 22:13:49
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冰山来啦

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 很好 2011-12-09 00:59:18
昺昺(金币+2): 2011-12-09 09:00:57
判断基因是否上调肯定要跟Ａｃｔｉｎ等类似的基因比较啊，要不你怎能保证原来ｃＤＮＡ浓度就一样啊，建议新手不要直接做定量，先从RT做起
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6楼2011-12-08 23:27:36
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昺昺

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 冰山来啦 at 2011-12-08 23:27:36:
判断基因是否上调肯定要跟Ａｃｔｉｎ等类似的基因比较啊，要不你怎能保证原来ｃＤＮＡ浓度就一样啊，建议新手不要直接做定量，先从RT做起

我是选用了一个管家基因作为内参，然后做相对定量，我的目的基因相对于参照组来说大约是1.5左右，该如何具体判断呢，还请继续指教
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太阳出来，星星要走。
7楼2011-12-09 09:00:44
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冰山来啦

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

昺昺(金币+3): 2011-12-09 20:57:37
引用回帖:
6楼: Originally posted by 冰山来啦 at 2011-12-08 23:27:36:
判断基因是否上调肯定要跟Ａｃｔｉｎ等类似的基因比较啊，要不你怎能保证原来ｃＤＮＡ浓度就一样啊，建议新手不要直接做定量，先从RT做起

做半定量时，首先要把管家基因的扩增亮度调到大概一致（当然是肉眼观察啦）一般24-26个循环为宜，然后再在此条件下比较其它基因的表达，当然相对定量只能根据相同循环数下条带的量度来判断和比较基因的表达情况，实时定量（qRT）呢，就会告诉你一数值，可以根据相应公式计算相对管家基因的表达倍数，来比较基因被上调还是抑制
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8楼2011-12-09 20:04:13
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

昺昺(金币+5): 2011-12-10 12:49:43
变化多大才算显著，这是统计学的问题了……P值大于多少多少是差异显著，大于多少多少是差异极显著……具体我也不懂，楼主可以看看教材吧。
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9楼2011-12-10 02:03:51
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

昺昺(金币+5): 2011-12-10 12:51:23
昺昺(金币+20): 2011-12-25 10:46:17
引用回帖:
2楼: Originally posted by 昺昺 at 2011-12-08 18:51:45:
我做的一般是三个重复，重复性不太好，靶比较大，还请高手指点一二。
还有，判断一个基因的上调与否，使用什么样的标准？只要实验组的相对定量比对照组高就能说明是上调吗？还是说增加不超过一定范围就是没有变化？

一般一次实验里重复3管就可以了。要提高重复性：
1.操作手法，加样尽可能准；
2.尽量配成体系，比如说可以把除了模板、引物的成分配好，按照不同引物分装，然后加入引物，按照不同模板再分装，最后每管单独加入模板；
3.选用好的耗材，特别是管子，很多山寨货盖不紧，蒸发厉害；
4.如果仪器可以做，引入Rox，可以矫正液体量的差异；
5.不同的样品，尽量保证用量一致。从反转录开始，就用同样量的RNA。虽然actin可以矫正样品量差异，但是还是尽量从一开始就控制好。
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昺昺
10楼2011-12-10 02:09:53
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