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昺昺

木虫 (小有名气)

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[求助] 实时荧光定量的数据导出后怎么处理啊？

如题，我做的是比较CT，是新手，请多多指教，不甚感激！

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太阳出来，星星要走。

1楼 2011-12-08 18:23:10

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

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【答案】应助回帖

昺昺(金币+5): 2011-12-10 12:51:23
昺昺(金币+20): 2011-12-25 10:46:17

引用回帖:

2楼: Originally posted by 昺昺 at 2011-12-08 18:51:45:
我做的一般是三个重复，重复性不太好，靶比较大，还请高手指点一二。
还有，判断一个基因的上调与否，使用什么样的标准？只要实验组的相对定量比对照组高就能说明是上调吗？还是说增加不超过一定范围就是没有变化？

一般一次实验里重复3管就可以了。要提高重复性：
1.操作手法，加样尽可能准；
2.尽量配成体系，比如说可以把除了模板、引物的成分配好，按照不同引物分装，然后加入引物，按照不同模板再分装，最后每管单独加入模板；
3.选用好的耗材，特别是管子，很多山寨货盖不紧，蒸发厉害；
4.如果仪器可以做，引入Rox，可以矫正液体量的差异；
5.不同的样品，尽量保证用量一致。从反转录开始，就用同样量的RNA。虽然actin可以矫正样品量差异，但是还是尽量从一开始就控制好。