24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1755  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

thinkerboy

铁虫 (小有名气)

[求助] 相对荧光定量cDNA的问题

求问坛子里的各位大神,我做相对荧光定量,首先提组织RNA,然后反转录成cDNA,以cDNA做模板做荧光定量,我主要做不同组织里的目的基因的相对表达量,请问我在提各个组织RNA,反转录后,要不要将各个组织反转录的cDNA测一下浓度,然后将各个组织的cDNA浓度稀释调整到相同的浓度,作为模板做荧光定量。也就是说我需要调整一下RNA浓度再反转录,或者是统一一下各个组织的cDNA浓度再作模板吗。

[ Last edited by thinkerboy on 2013-7-26 at 21:10 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
thinkerboy(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-27 21:44:44
你描述的这个其实就是不同sample之间互相比较时 “均一化”的概念:normalization。
而qPCR常用的均一化手段就是通过一个被认为在不同组织中表达量恒定的基因作为标杆,即内参基因,比如actin。
3楼2013-07-27 19:43:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:22:44
本帖内容被屏蔽

2楼2013-07-27 11:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
thinkerboy(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-27 21:44:51
没有实质性必要,因为你有内参。但在反转录之前一定要测总RNA浓度,防止浓度过高,反转录酶不足导致反转录不完全! Good luck!
互助互励,共奋共进!!
4楼2013-07-27 21:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-27 17:14:23
个人觉得要测RNA浓度,根据RNA浓度做逆转录。带上你的内参,就能相对定量啦
5楼2013-07-28 19:21:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0860004 求调剂 309分 +9 Yin DY 2026-04-08 9/450 2026-04-11 22:55 by dongdian1
[考研] 求调剂 +11 月@163.com 2026-04-07 13/650 2026-04-11 22:55 by BruceLiu320
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 269求调剂 +11 啊啊我我 2026-04-07 11/550 2026-04-11 16:45 by vgtyfty
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 293求调剂 +6 勇远库爱314 2026-04-08 6/300 2026-04-11 10:08 by zhq0425
[考研] 307求调剂 +8 tzq94092 2026-04-10 8/400 2026-04-10 17:33 by 286640313
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +33 刺痛jk 2026-04-06 34/1700 2026-04-09 18:31 by hy861222
[考研] 本科郑州大学,一志愿华东师范大学282求调剂 +23 熊哥xtk 2026-04-07 26/1300 2026-04-09 17:17 by 18446523
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 求调剂 +8 吃口冰激凌 2026-04-07 8/400 2026-04-09 08:03 by 5268321
[考研] 一志愿郑州大学085600求调剂 +21 吃的不少 2026-04-05 24/1200 2026-04-08 16:47 by sunhuadong
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 071000生物学,一志愿深圳大学296分,求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见