24小时热门版块排行榜    

查看: 1395  |  回复: 9

sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 再次求助——蛋白纯化结果

感谢大家上次对我的实验指导,听从意见,换了离子交换树脂,改成了Capto adhere,没怎么看文献就先做了一次实验,请大家帮忙分析结果及指正啊,谢谢了
上样是10ml,蛋白含量大概1.5mg左右,柱子是1ml的预装柱。缓冲液是50mM Tris,pH6.0,洗脱用1M NaCl。上柱发现目的蛋白流穿,洗脱时候只有很弱的峰,检测了还是还有目的蛋白。我看这种填料的是吸附杂蛋白和DNA的。我检测了一下,发现DNA去除效果很差。我该用什么条件继续摸索呢?我自己是打算改缓冲液的pH值,看下能不能让蛋白挂柱,请问可行不?
再次求助——蛋白纯化结果
1.jpg

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-24 at 09:26 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

你的日子如何,你的力量也必如何!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-24 09:02:53
目前来看ph是你唯一可以改变的条件
所以可以选择改变它试一试,不过之间你要先了解一下你的蛋白pi
修身、齐家、治国、平天下
2楼2013-07-23 20:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-23 22:21:04
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-24 09:13:01
“上柱发现目的蛋白流穿,洗脱时候只有很弱的峰,检测了还是还有目的蛋白”
你可以尝试一下pH了,就像楼上说的,了解一下你的蛋白的PI比较有必要。
同样的pH,也有很多种的buffer来选择,并且binding buffer的盐浓度也是可以尝试的,下次跑的时候多平衡一下你的柱子试试。
3楼2013-07-23 21:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danbomingyue

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-24 09:12:07
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-24 11:24:30
本帖内容被屏蔽

4楼2013-07-24 08:33:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-23 20:16:06
目前来看ph是你唯一可以改变的条件
所以可以选择改变它试一试,不过之间你要先了解一下你的蛋白pi

之前试过用Q的柱子来试,pH8的时候部分流穿部分挂柱,pH10的时候全部挂柱了
你的日子如何,你的力量也必如何!
5楼2013-07-24 09:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by danbomingyue at 2013-07-24 08:33:14
目的蛋白大部分流穿,洗脱有微弱的峰,表明你的填料能够吸附目的蛋白,但是你的上样pH条件处于一个介于挂柱和穿出之间,建议根据你的目的蛋白的pI,调整上样pH。另外Tris-HCl在pH6.0时的缓冲能力很弱,如果pH上调, ...

明白,我看看有没有醋酸钠,我看有些人都是用醋酸钠的,可以不?
你的日子如何,你的力量也必如何!
6楼2013-07-24 09:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-23 21:19:30
“上柱发现目的蛋白流穿,洗脱时候只有很弱的峰,检测了还是还有目的蛋白”
你可以尝试一下pH了,就像楼上说的,了解一下你的蛋白的PI比较有必要。
同样的pH,也有很多种的buffer来选择,并且binding buffer的盐浓 ...

一般来说buffer会选用什么?
你的日子如何,你的力量也必如何!
7楼2013-07-24 09:12:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danbomingyue

禁虫 (正式写手)

★ ★
sxxuan: 金币+2, 有帮助 2013-07-24 13:38:08
本帖内容被屏蔽

8楼2013-07-24 10:13:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by danbomingyue at 2013-07-24 10:13:41
buffer的选择一般是首先考虑你的pI,确定了PI之后buffer就很好选择了。
...

好的,谢谢
你的日子如何,你的力量也必如何!
9楼2013-07-24 13:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-26 09:04:29
引用回帖:
7楼: Originally posted by sxxuan at 2013-07-24 09:12:55
一般来说buffer会选用什么?...

没有一般来说用什么,关键是你想要什么pH了,并且考虑一下哪些buffer对你的蛋白有副作用了
10楼2013-07-25 21:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sxxuan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 326求调剂 +3 上岸的小葡 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:50 by 无际的草原
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:06 by tranquil_ya
[考研] 328,0703考生求调剂,一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
请填处理意见