24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3666)
>硕博家园 (1035)
>虫友互识 (1031)
>导师招生 (206)
>休闲灌水 (136)
>考博 (123)
>文献求助 (114)
>博后之家 (104)
>海外博后 (100)
>学术会议 (73)
>招聘信息布告栏 (60)
>论文投稿 (60)
>催化 (35)
>考研 (25)
>基金申请 (12)
>绿色求助(高悬赏) (11)

返回列表

aofeng860308

木虫 (正式写手)

应助: 53 (初中生)
金币: 3661.4
散金: 145
红花: 5
帖子: 497
在线: 531.1小时
虫号: 938003
注册: 2010-01-06
性别: GG
专业: 环境分析化学

[求助] 纯化时蛋白一上柱就絮凝

恼死了，用大肠杆菌表达系统表达了一蛋白，可溶，在上清中。可是纯化时，将蛋白一加到Ni2+柱中，马上就絮凝了，与填料一起结合成团状的东西。
起初蛋白浓度挺高，在4℃下和-20℃下过夜都会絮凝起来，后来将蛋白溶液稀释了5-8倍，保存时不会出现絮凝了，可是一上柱又出现了絮凝，真是搞不懂了！
请大侠们给我分析分析，究竟怎么回事？能不能再给我提点建议什么的，谢谢啦！

回复此楼

» 猜你喜欢

WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有154人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点已经有0人回复
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

蛋白质的Ni柱纯化问题已经有23人回复
蛋白纯化时目的蛋白没有洗脱下来已经有14人回复
镍柱蛋白纯化，求好心人讲解。已经有4人回复
关于蛋白质纯化柱子的问题已经有9人回复
His标签的蛋白纯化柱子已经有10人回复
今天你纯化蛋白了吗？跪求柱子挂不好的原因。。。。已经有15人回复
关于镍柱纯化蛋白已经有10人回复
GST柱纯化蛋白是否变性已经有6人回复
如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签已经有17人回复
蛋白纯化遇到问题已经有22人回复
蛋白质纯化凝胶层析已经有9人回复
FPLC蛋白纯化堵柱子？已经有24人回复
his标签蛋白纯化，不挂柱已经有18人回复
蛋白纯化怎么去除核酸已经有14人回复
镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教已经有18人回复
【求助/交流】为什么镍柱纯化可溶性蛋白，电泳结果总是显示不纯呢？已经有9人回复
【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？已经有19人回复
【分享】蛋白质纯化个人总结2 已经有38人回复
基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱已经有26人回复

1楼 2013-05-23 19:13:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

robustli

银虫 (小有名气)

应助: 62 (初中生)
金币: 427.1
散金: 40
红花: 3
帖子: 126
在线: 72.4小时
虫号: 2251936
注册: 2013-01-20
性别: GG
专业: 免疫遗传学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aofeng860308(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:14:48
aofeng860308: 金币+1, ★有帮助, OK，Let me try，Thank you。 2013-05-24 10:25:18

try to add more NaCl salt into the buffer, load less sample to the column. Furthermore, adjust your PH to see if under different PH can maximize the protein's dissolvability.