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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » His标签的蛋白纯化柱子
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yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] His标签的蛋白纯化柱子

每次纯化，我都会把柱子里的填料重悬起来，这样会对填料有什么不好的影响吗？还有就是填柱子后胶里面有气泡，会对纯化有影响吗？谢谢哦
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1楼 2012-06-13 19:47:12
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回帖置顶 ( 共有1个 )

zhouyunbo

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-13 15:04:32
yeshui: 金币+1, ★有帮助 2012-08-13 20:56:53
yeshui: 回帖置顶 2012-08-13 20:58:12
每次装柱子都会对填料产生一定伤害，毕竟每颗填料里都有无数的小孔，每次装柱都会产生一定的挤压，填料会变形。                                          气泡对柱效的伤害特别大，需要尽量减少。         为什么每次都有重悬，柱子用20%的乙醇可以保存很久，保存半年再用都没问题。
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要舍得
6楼2012-08-13 13:38:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qianshengguo

铜虫 (小有名气)
柱子有些板结的时候可以重悬，重悬对柱子没有什么大的影响。但气泡的存在会影响柱子与蛋白的结合能效。
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5楼2012-07-03 19:19:35
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yeshui: 金币+1 2012-06-14 12:14:10
对填料没有影响。实际上亲和层析对柱床的要求很低，这样做对纯化结果没什么影响的。
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2楼2012-06-13 21:41:39
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wenqian0216

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yeshui: 金币+1, 我重悬之后是让蛋白液与填料很好的结合下的，我个人认为这样结合的更好，您觉得呢？ 2012-06-14 12:15:27
重悬就是为了赶气泡啊，最好保证没气泡，本人认为还是会有影响的
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3楼2012-06-13 22:00:53
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yeshui: 金币+2 2012-06-15 21:39:48
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:38:32
重悬对填料影响倒是不大，但老是重悬有些填料沉淀不及时就会损失掉，最好不要老是重装柱子，如果有气泡，可以把柱子倒打，这样可以排除气泡，或者装柱时上膜不要紧贴填料，可以留点空隙，这样即使产生气泡，柱子也不会干掉，不影响过柱。
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小小爬虫
4楼2012-06-14 15:34:55
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
yeshui: 金币+1, ★有帮助 2012-08-13 20:56:40
最好不要老是重装柱子，装柱子是个技术活，有气泡当然不好了，最好把气泡都除掉。
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7楼2012-08-13 17:05:21
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yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhouyunbo at 2012-08-13 13:38:45
每次装柱子都会对填料产生一定伤害，毕竟每颗填料里都有无数的小孔，每次装柱都会产生一定的挤压，填料会变形。                                          气泡对柱效的伤害特别大，需要尽量减少。         为什么 ...

感觉那样的话蛋白与填料可以更好的结合的
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8楼2012-08-13 20:56:29
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zhouyunbo

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yeshui at 2012-08-13 20:56:29
感觉那样的话蛋白与填料可以更好的结合的...

想更好的结合就在每次使用前做一次CIP，不同的填料可能会使用不同的清洗液做在线清洗，一般用0.1M的NaOH流20~30分钟然后水洗。用什么清洗液网上都可以查到
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要舍得
9楼2012-08-14 10:50:45
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zhouyunbo

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yeshui at 2012-08-13 20:56:29
感觉那样的话蛋白与填料可以更好的结合的...

你每次装的柱效都会不同，有好有坏，如果进行工艺摸索又会增加一个变量。想更好的结合，可以将填料压的紧一点、均匀一点。在柱子和填料可承受的范围内使用高压、均匀的流速，这样柱效会更高！
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yeshui
要舍得
10楼2012-08-14 10:58:10
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