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yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] His标签的蛋白纯化柱子

每次纯化,我都会把柱子里的填料重悬起来,这样会对填料有什么不好的影响吗?还有就是填柱子后胶里面有气泡,会对纯化有影响吗?谢谢哦
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)

柱子有些板结的时候可以重悬,重悬对柱子没有什么大的影响。但气泡的存在会影响柱子与蛋白的结合能效。
5楼2012-07-03 19:19:35
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普通回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yeshui: 金币+1 2012-06-14 12:14:10
对填料没有影响。实际上亲和层析对柱床的要求很低,这样做对纯化结果没什么影响的。
2楼2012-06-13 21:41:39
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wenqian0216

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yeshui: 金币+1, 我重悬之后是让蛋白液与填料很好的结合下的,我个人认为这样结合的更好,您觉得呢? 2012-06-14 12:15:27
重悬就是为了赶气泡啊,最好保证没气泡,本人认为还是会有影响的
3楼2012-06-13 22:00:53
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yeshui: 金币+2 2012-06-15 21:39:48
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:38:32
重悬对填料影响倒是不大,但老是重悬有些填料沉淀不及时就会损失掉,最好不要老是重装柱子,如果有气泡,可以把柱子倒打,这样可以排除气泡,或者装柱时上膜不要紧贴填料,可以留点空隙,这样即使产生气泡,柱子也不会干掉,不影响过柱。
小小爬虫
4楼2012-06-14 15:34:55
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zhouyunbo

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-13 15:04:32
yeshui: 金币+1, 有帮助 2012-08-13 20:56:53
yeshui: 回帖置顶 2012-08-13 20:58:12
每次装柱子都会对填料产生一定伤害,毕竟每颗填料里都有无数的小孔,每次装柱都会产生一定的挤压,填料会变形。                                          气泡对柱效的伤害特别大,需要尽量减少。         为什么每次都有重悬,柱子用20%的乙醇可以保存很久,保存半年再用都没问题。
要舍得
6楼2012-08-13 13:38:45
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


yeshui: 金币+1, 有帮助 2012-08-13 20:56:40
最好不要老是重装柱子,装柱子是个技术活,有气泡当然不好了,最好把气泡都除掉。
7楼2012-08-13 17:05:21
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yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhouyunbo at 2012-08-13 13:38:45
每次装柱子都会对填料产生一定伤害,毕竟每颗填料里都有无数的小孔,每次装柱都会产生一定的挤压,填料会变形。                                          气泡对柱效的伤害特别大,需要尽量减少。         为什么 ...

感觉那样的话蛋白与填料可以更好的结合的
8楼2012-08-13 20:56:29
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zhouyunbo

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yeshui at 2012-08-13 20:56:29
感觉那样的话蛋白与填料可以更好的结合的...

想更好的结合就在每次使用前做一次CIP,不同的填料可能会使用不同的清洗液做在线清洗,一般用0.1M的NaOH流20~30分钟然后水洗。用什么清洗液网上都可以查到
要舍得
9楼2012-08-14 10:50:45
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zhouyunbo

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yeshui at 2012-08-13 20:56:29
感觉那样的话蛋白与填料可以更好的结合的...

你每次装的柱效都会不同,有好有坏,如果进行工艺摸索又会增加一个变量。想更好的结合,可以将填料压的紧一点、均匀一点。在柱子和填料可承受的范围内使用高压、均匀的流速,这样柱效会更高!

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要舍得
10楼2012-08-14 10:58:10
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