9楼: Originally posted by mitocam at 2013-05-24 11:02:05
最近我碰到了类似情况。

我的蛋白质含多个半胱氨酸，过Ni柱时沉淀，需要加TCEP稳定蛋白质。可以试试《5mM TCEP。

要么改成GST标记，用GST柱分离，效果会更好，而且不用担心还原剂的使用。

12楼: Originally posted by mitocam at 2013-05-24 11:33:50
TCEP还原能力更强，更稳定，而且不受金属离子催化氧化的影响，因为DTT或ME在有金属离子（如NI柱上的镍离子）存在的情况下，会很快被氧化失效的。

TCEP是否解决问题，决定于你蛋白质絮凝的根源，如果单单因为还原 ...

10楼: Originally posted by whb21 at 2013-05-24 11:03:14
我做的时候没什么影响，因为蛋白表达量比较大，所以没当回事，上样结束之后，顶上有一小段柱材料变白了，之后用漂洗液冲洗杂蛋白就没有了，最后洗脱目标蛋白也没见到有什么影响.....

7楼: Originally posted by aofeng860308 at 2013-05-24 10:56:15
看到这种现象就没往下做了，还不知道能不能洗下来呢。我的裂解液中也加10%的甘油了的。...

4楼: Originally posted by aofeng860308 at 2013-05-24 10:18:36
我的样品中是加有0.5M的NaCl的。这个蛋白的半胱氨酸确实较多，由于大多填料都不耐DTT，所以选择加了15mM的β-ME，可是还是有这个问题。...