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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » GST柱纯化蛋白 是否变性
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新虫 (正式写手)

[交流] GST柱纯化蛋白 是否变性已有5人参与

一事不解 请教大家
GST柱纯化蛋白后，蛋白质是自然状态 还是变性状态？因为一般用还原型GSH竞争洗脱，所以怀疑这个问题
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1楼2012-04-13 13:23:46
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
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silicare: 金币+3, BioEPI+1, 欢迎发帖交流 2012-04-16 09:03:14
关键步骤在于上柱前是否变了性。过柱有复性作用，但不可依赖它。一般可以用特异蛋白酶来切除GST，如thrombin等，但是如果不是再柱上酶切，最后溶液中会有三个产物，这要引起注意。
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3楼2012-04-15 06:25:48
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wen1023tao

铜虫 (小有名气)
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silicare: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-04-16 09:01:10
如果是包涵体，过柱的过程就是一个柱上复性的过程，如果不是包涵体，纯化出来的是活性蛋白，但考虑到GST标签比较大，有一两百个AA，可能连在上面影响原来蛋白的折叠，可以查查载体资料，看看用什么蛋白酶消化下，去掉GST
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2楼2012-04-13 15:37:36
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
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使用的还原型GSH的浓度低，不会影响蛋白的活性

5mM
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4楼2012-04-15 15:02:00
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新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xhjggl at 2012-04-15 15:02:00:
使用的还原型GSH的浓度低，不会影响蛋白的活性

5mM

看来还是有影响的。用的
2mM和10mM
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5楼2012-04-15 16:21:48
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shuaizhao

新虫 (初入文坛)
不太懂啊
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6楼2012-04-24 22:17:07
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rhguo

铜虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
4楼: Originally posted by xhjggl at 2012-04-15 15:02:00:
使用的还原型GSH的浓度低，不会影响蛋白的活性

5mM

csh的protocol是推荐用50mM的呢
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7楼2012-04-27 16:46:28
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