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新虫 (正式写手)

[交流] GST柱纯化蛋白 是否变性 已有5人参与

一事不解 请教大家
GST柱纯化蛋白后,蛋白质是自然状态 还是变性状态?因为一般用还原型GSH竞争洗脱,所以怀疑这个问题
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 欢迎发帖交流 2012-04-16 09:03:14
关键步骤在于上柱前是否变了性。过柱有复性作用,但不可依赖它。一般可以用特异蛋白酶来切除GST,如thrombin等,但是如果不是再柱上酶切,最后溶液中会有三个产物,这要引起注意。
3楼2012-04-15 06:25:48
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普通回帖

wen1023tao

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-04-16 09:01:10
如果是包涵体,过柱的过程就是一个柱上复性的过程,如果不是包涵体,纯化出来的是活性蛋白,但考虑到GST标签比较大,有一两百个AA,可能连在上面影响原来蛋白的折叠,可以查查载体资料,看看用什么蛋白酶消化下,去掉GST
2楼2012-04-13 15:37:36
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xhjggl

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
使用的还原型GSH的浓度低,不会影响蛋白的活性

5mM
4楼2012-04-15 15:02:00
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256k

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xhjggl at 2012-04-15 15:02:00:
使用的还原型GSH的浓度低,不会影响蛋白的活性

5mM

看来还是有影响的。用的
2mM和10mM
5楼2012-04-15 16:21:48
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shuaizhao

新虫 (初入文坛)

不太懂啊
6楼2012-04-24 22:17:07
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rhguo

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by xhjggl at 2012-04-15 15:02:00:
使用的还原型GSH的浓度低,不会影响蛋白的活性

5mM

csh的protocol是推荐用50mM的呢
7楼2012-04-27 16:46:28
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