24小时热门版块排行榜    

查看: 1688  |  回复: 6
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看

256k

新虫 (正式写手)

[交流] GST柱纯化蛋白 是否变性 已有5人参与

一事不解 请教大家
GST柱纯化蛋白后,蛋白质是自然状态 还是变性状态?因为一般用还原型GSH竞争洗脱,所以怀疑这个问题
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 欢迎发帖交流 2012-04-16 09:03:14
关键步骤在于上柱前是否变了性。过柱有复性作用,但不可依赖它。一般可以用特异蛋白酶来切除GST,如thrombin等,但是如果不是再柱上酶切,最后溶液中会有三个产物,这要引起注意。
3楼2012-04-15 06:25:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wen1023tao

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-04-16 09:01:10
如果是包涵体,过柱的过程就是一个柱上复性的过程,如果不是包涵体,纯化出来的是活性蛋白,但考虑到GST标签比较大,有一两百个AA,可能连在上面影响原来蛋白的折叠,可以查查载体资料,看看用什么蛋白酶消化下,去掉GST
2楼2012-04-13 15:37:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
使用的还原型GSH的浓度低,不会影响蛋白的活性

5mM
4楼2012-04-15 15:02:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xhjggl at 2012-04-15 15:02:00:
使用的还原型GSH的浓度低,不会影响蛋白的活性

5mM

看来还是有影响的。用的
2mM和10mM
5楼2012-04-15 16:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuaizhao

新虫 (初入文坛)

不太懂啊
6楼2012-04-24 22:17:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rhguo

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by xhjggl at 2012-04-15 15:02:00:
使用的还原型GSH的浓度低,不会影响蛋白的活性

5mM

csh的protocol是推荐用50mM的呢
7楼2012-04-27 16:46:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 256k 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
请填处理意见