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aofeng860308

木虫 (正式写手)

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[求助] 纯化时蛋白一上柱就絮凝

恼死了，用大肠杆菌表达系统表达了一蛋白，可溶，在上清中。可是纯化时，将蛋白一加到Ni2+柱中，马上就絮凝了，与填料一起结合成团状的东西。
起初蛋白浓度挺高，在4℃下和-20℃下过夜都会絮凝起来，后来将蛋白溶液稀释了5-8倍，保存时不会出现絮凝了，可是一上柱又出现了絮凝，真是搞不懂了！
请大侠们给我分析分析，究竟怎么回事？能不能再给我提点建议什么的，谢谢啦！

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1楼 2013-05-23 19:13:51

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edoz1986

新虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aofeng860308: 金币+1, ★有帮助 2013-05-24 10:25:30

1 可以加入0.5M nacl试试
2 看一下你的氨基酸组成，是否有独立的半胱氨酸，有的话要加dtt 的。否则就都氧化聚集而沉淀了。

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3楼2013-05-24 08:22:45

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robustli

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aofeng860308(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:14:48
aofeng860308: 金币+1, ★有帮助, OK，Let me try，Thank you。 2013-05-24 10:25:18

try to add more NaCl salt into the buffer, load less sample to the column. Furthermore, adjust your PH to see if under different PH can maximize the protein's dissolvability.

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