24小时热门版块排行榜    

查看: 2391  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化时蛋白一上柱就絮凝

恼死了,用大肠杆菌表达系统表达了一蛋白,可溶,在上清中。可是纯化时,将蛋白一加到Ni2+柱中,马上就絮凝了,与填料一起结合成团状的东西。
起初蛋白浓度挺高,在4℃下和-20℃下过夜都会絮凝起来,后来将蛋白溶液稀释了5-8倍,保存时不会出现絮凝了,可是一上柱又出现了絮凝,真是搞不懂了!
请大侠们给我分析分析,究竟怎么回事?能不能再给我提点建议什么的,谢谢啦!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by whb21 at 2013-05-24 10:28:10
我也遇见过类似情况,但貌似不影响纯化...

这个不影响纯化吗?我看到这现象就没往下做了!
8楼2013-05-24 10:56:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aofeng860308(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-24 03:14:48
aofeng860308: 金币+1, 有帮助, OK,Let me try,Thank you。 2013-05-24 10:25:18
try to add more NaCl salt into the buffer, load less sample to the column. Furthermore, adjust your PH to see if under different PH can maximize the protein's dissolvability.
immunologyparasite
2楼2013-05-24 00:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
aofeng860308: 金币+1, 有帮助 2013-05-24 10:25:30
1 可以加入0.5M nacl试试
2 看一下你的氨基酸组成,是否有独立的半胱氨酸,有的话要加dtt 的。否则就都氧化聚集而沉淀了。
3楼2013-05-24 08:22:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-24 08:22:45
1 可以加入0.5M nacl试试
2 看一下你的氨基酸组成,是否有独立的半胱氨酸,有的话要加dtt 的。否则就都氧化聚集而沉淀了。

我的样品中是加有0.5M的NaCl的。这个蛋白的半胱氨酸确实较多,由于大多填料都不耐DTT,所以选择加了15mM的β-ME,可是还是有这个问题。
4楼2013-05-24 10:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 21/1050 2026-08-15 19:30 by pztchina
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见