24小时热门版块排行榜    

查看: 1638  |  回复: 9

sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 再次求助——蛋白纯化结果

感谢大家上次对我的实验指导,听从意见,换了离子交换树脂,改成了Capto adhere,没怎么看文献就先做了一次实验,请大家帮忙分析结果及指正啊,谢谢了
上样是10ml,蛋白含量大概1.5mg左右,柱子是1ml的预装柱。缓冲液是50mM Tris,pH6.0,洗脱用1M NaCl。上柱发现目的蛋白流穿,洗脱时候只有很弱的峰,检测了还是还有目的蛋白。我看这种填料的是吸附杂蛋白和DNA的。我检测了一下,发现DNA去除效果很差。我该用什么条件继续摸索呢?我自己是打算改缓冲液的pH值,看下能不能让蛋白挂柱,请问可行不?
再次求助——蛋白纯化结果
1.jpg

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-24 at 09:26 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

你的日子如何,你的力量也必如何!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-24 09:02:53
目前来看ph是你唯一可以改变的条件
所以可以选择改变它试一试,不过之间你要先了解一下你的蛋白pi
修身、齐家、治国、平天下
2楼2013-07-23 20:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-23 22:21:04
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-24 09:13:01
“上柱发现目的蛋白流穿,洗脱时候只有很弱的峰,检测了还是还有目的蛋白”
你可以尝试一下pH了,就像楼上说的,了解一下你的蛋白的PI比较有必要。
同样的pH,也有很多种的buffer来选择,并且binding buffer的盐浓度也是可以尝试的,下次跑的时候多平衡一下你的柱子试试。
3楼2013-07-23 21:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danbomingyue

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-24 09:12:07
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-24 11:24:30
本帖内容被屏蔽

4楼2013-07-24 08:33:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-23 20:16:06
目前来看ph是你唯一可以改变的条件
所以可以选择改变它试一试,不过之间你要先了解一下你的蛋白pi

之前试过用Q的柱子来试,pH8的时候部分流穿部分挂柱,pH10的时候全部挂柱了
你的日子如何,你的力量也必如何!
5楼2013-07-24 09:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by danbomingyue at 2013-07-24 08:33:14
目的蛋白大部分流穿,洗脱有微弱的峰,表明你的填料能够吸附目的蛋白,但是你的上样pH条件处于一个介于挂柱和穿出之间,建议根据你的目的蛋白的pI,调整上样pH。另外Tris-HCl在pH6.0时的缓冲能力很弱,如果pH上调, ...

明白,我看看有没有醋酸钠,我看有些人都是用醋酸钠的,可以不?
你的日子如何,你的力量也必如何!
6楼2013-07-24 09:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-23 21:19:30
“上柱发现目的蛋白流穿,洗脱时候只有很弱的峰,检测了还是还有目的蛋白”
你可以尝试一下pH了,就像楼上说的,了解一下你的蛋白的PI比较有必要。
同样的pH,也有很多种的buffer来选择,并且binding buffer的盐浓 ...

一般来说buffer会选用什么?
你的日子如何,你的力量也必如何!
7楼2013-07-24 09:12:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danbomingyue

禁虫 (正式写手)

★ ★
sxxuan: 金币+2, ★有帮助 2013-07-24 13:38:08
本帖内容被屏蔽

8楼2013-07-24 10:13:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by danbomingyue at 2013-07-24 10:13:41
buffer的选择一般是首先考虑你的pI,确定了PI之后buffer就很好选择了。
...

好的,谢谢
你的日子如何,你的力量也必如何!
9楼2013-07-24 13:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
sxxuan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-26 09:04:29
引用回帖:
7楼: Originally posted by sxxuan at 2013-07-24 09:12:55
一般来说buffer会选用什么?...

没有一般来说用什么,关键是你想要什么pH了,并且考虑一下哪些buffer对你的蛋白有副作用了
10楼2013-07-25 21:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sxxuan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
请填处理意见