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xiaoyu0127铜虫 (小有名气)
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[求助]
AKTA蛋白纯化 考染检测无蛋白
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事情发展如下： 1.本人重组质粒在Rosetta中诱导表达后，得到上清沉淀都有一定量的蛋白表达。于是扩大到500ml诱导，跑胶考染检测有蛋白。 2.AKTA当天纯化，在咪唑缓冲液100mM,250mM都有峰，师兄说应该是蛋白。 3.但当时实验室没有透析袋，纯化的蛋白没有立即透析，第二天才用透析袋透析了一天一夜，透析前的蛋白也没有出现沉淀，也没什么异味，用紫外检测浓度纯度也没有降低。透析后就跑胶考染，但没有出现任何条带（胶没有问题，有阳性对照）。透析后又检测了浓度，仍然没变低。 4.照理说就算因为没有立即透析，蛋白降解，也不应该一点条带都看不见吧，恳请各位师兄师姐前辈指教。万分感谢~ |
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