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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » CM-52纯化蛋白问题
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DXY1

新虫 (初入文坛)

[求助] CM-52纯化蛋白问题

用CM-52对蛋白质进行纯化，以前能纯化出目的蛋白，昨天纯化鸡溶菌酶也能纯化出，但今天纯化目的蛋白，流出液完全检测不出UV值，疑似没有蛋白流出，不知道是怎么回事
洗脱液和柱子都换成新的，不过柱子是自己装的
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1楼 2012-08-04 16:11:33
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
弱阴离子交换，是不是含盐量太高导致不能吸附蛋白质。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-08-05 01:43:56
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新再装个柱子再试试看。
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3楼2012-08-05 08:00:51
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
明明是弱阳离子介质嘛，一楼说的有误，楼主信息太少没法指导，buffer 蛋白pI都没有
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4楼2012-08-05 09:22:53
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
4楼: Originally posted by 会思想的芦苇 at 2012-08-05 09:22:53
明明是弱阳离子介质嘛，一楼说的有误，楼主信息太少没法指导，buffer 蛋白pI都没有

我看错了
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-08-05 18:20:57
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DXY1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-05 01:43:56
弱阴离子交换，是不是含盐量太高导致不能吸附蛋白质。

是弱阴离子交换柱，如果不能吸附蛋白质的话，那蛋白质应该会流出来，那紫外应该会被检测到，现在是流出的液体中检测不到UV值得变化
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6楼2012-08-06 18:34:15
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DXY1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 会思想的芦苇 at 2012-08-05 09:22:53
明明是弱阳离子介质嘛，一楼说的有误，楼主信息太少没法指导，buffer 蛋白pI都没有

用于洗脱的是，醋酸铵 一个是PH为5.8 浓度为10mM,另一个为PH=8.0，浓度为300mM，蛋白质的PH为5
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7楼2012-08-06 18:38:58
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by DXY1 at 2012-08-06 18:38:58
用于洗脱的是，醋酸铵 一个是PH为5.8 浓度为10mM,另一个为PH=8.0，浓度为300mM，蛋白质的PH为5...

我没理解错的话，你的平衡缓冲液是pH8.0,蛋白等电点是5，那么在平衡buffer条件下，蛋白带负点，而CM是阳离子介质，蛋白是不会和介质结合的，所以洗脱没信号也很正常，而你所说的能结合溶菌酶没错，因为溶菌酶是碱性蛋白，pI好像是9.0多吧，在pH8.0时是带正电，所以洗脱时也有信号，另外，很少做离子交换层析时用改变pH洗脱，一般都增加盐浓度，但改变pH也没错，一般来讲，阳离子交换，增加pH洗脱，阴离子交换，降低pH洗脱。
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8楼2012-08-07 19:46:32
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 会思想的芦苇 at 2012-08-07 19:46:32
我没理解错的话，你的平衡缓冲液是pH8.0,蛋白等电点是5，那么在平衡buffer条件下，蛋白带负点，而CM是阳离子介质，蛋白是不会和介质结合的，所以洗脱没信号也很正常，而你所说的能结合溶菌酶没错，因为溶菌酶是碱性 ...

等电点为5的酸性蛋白，如果要用吸附模式纯化，建议选择DEAE或Q等阴离子介质
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9楼2012-08-07 19:50:15
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DXY1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 会思想的芦苇 at 2012-08-07 19:46:32
我没理解错的话，你的平衡缓冲液是pH8.0,蛋白等电点是5，那么在平衡buffer条件下，蛋白带负点，而CM是阳离子介质，蛋白是不会和介质结合的，所以洗脱没信号也很正常，而你所说的能结合溶菌酶没错，因为溶菌酶是碱性 ...

我的平衡缓冲液是PH=5.8的醋酸铵，还有就是是用的弱阳离子交换柱
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10楼2012-08-08 10:06:49
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