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DXY1

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1361580
注册: 2011-08-05
性别: GG
专业: 动物遗传学

[求助] CM-52纯化蛋白问题

用CM-52对蛋白质进行纯化，以前能纯化出目的蛋白，昨天纯化鸡溶菌酶也能纯化出，但今天纯化目的蛋白，流出液完全检测不出UV值，疑似没有蛋白流出，不知道是怎么回事
洗脱液和柱子都换成新的，不过柱子是自己装的

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1楼 2012-08-04 16:11:33

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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

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专业: 生物技术药物

【答案】应助回帖

引用回帖:

7楼: Originally posted by DXY1 at 2012-08-06 18:38:58
用于洗脱的是，醋酸铵一个是PH为5.8 浓度为10mM,另一个为PH=8.0，浓度为300mM，蛋白质的PH为5...

我没理解错的话，你的平衡缓冲液是pH8.0,蛋白等电点是5，那么在平衡buffer条件下，蛋白带负点，而CM是阳离子介质，蛋白是不会和介质结合的，所以洗脱没信号也很正常，而你所说的能结合溶菌酶没错，因为溶菌酶是碱性蛋白，pI好像是9.0多吧，在pH8.0时是带正电，所以洗脱时也有信号，另外，很少做离子交换层析时用改变pH洗脱，一般都增加盐浓度，但改变pH也没错，一般来讲，阳离子交换，增加pH洗脱，阴离子交换，降低pH洗脱。