应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » AKTA蛋白纯化 考染检测无蛋白
51/1返回列表
查看: 1639  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

[求助] AKTA蛋白纯化 考染检测无蛋白

事情发展如下：
1.本人重组质粒在Rosetta中诱导表达后，得到上清沉淀都有一定量的蛋白表达。于是扩大到500ml诱导，跑胶考染检测有蛋白。
2.AKTA当天纯化，在咪唑缓冲液100mM,250mM都有峰，师兄说应该是蛋白。
3.但当时实验室没有透析袋，纯化的蛋白没有立即透析，第二天才用透析袋透析了一天一夜，透析前的蛋白也没有出现沉淀，也没什么异味，用紫外检测浓度纯度也没有降低。透析后就跑胶考染，但没有出现任何条带（胶没有问题，有阳性对照）。透析后又检测了浓度，仍然没变低。
4.照理说就算因为没有立即透析，蛋白降解，也不应该一点条带都看不见吧，恳请各位师兄师姐前辈指教。万分感谢~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-10 16:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyu0127: 金币+1, 谢谢 2013-05-13 15:47:09
如果你那个降解比较严重，成小碎片了，普通的蛋白胶就会出现看不到的情况，因为分子量小，已经跑出去了！
你可以试试在纯化过程中加一些蛋白酶抑制剂之类，buffer中适当加一些EDTA之类的！
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-12 19:55:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-05-10 18:47:24
xiaoyu0127: 金币+3, ★有帮助, 担心是浓度低的问题，再用抗体做一下western 2013-05-13 15:46:17
做学术的，不像做蛋白技术表达的。你的量毕竟很小！我感觉你可能是洗脱下来时，蛋白浓度很低！建议你跑SDS-PAGE时，蛋白上样量增大一点！可以这样：
你把你的蛋白点个梯度，旁边点个BSA作对照！还可以通过BSA比对的方法估计蛋白浓度！
赞一下 回复此楼
长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
2楼2013-05-10 18:34:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励 2013-05-10 23:56:12
xiaoyu0127: 金币+1, 请问biorad染色与考染有什么区别吗 2013-05-13 15:47:59
加biorad那种染料，有蛋白可以检测到，变色。
赞一下 回复此楼
修身、齐家、治国、平天下
3楼2013-05-10 23:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyu0127: 金币+1, ★有帮助, 谢谢，我未纯化，纯化后，透析后都留样了，但无条带 2013-05-13 15:46:59
根据你的描述, 透析前后紫外检测的度数不变而最后样品跑胶却没有条带, 我觉得你的样品在透析前就几乎不含有你要的蛋白. 就像楼上说的, 下次实验是几个关键的步骤都留一点样, 跑胶时一并带上便于分析问题出在哪里.
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-13 00:26:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +3 Isak0320 2026-10-12 5/250 2026-10-12 16:42 by Isak0320
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 7/350 2026-10-12 14:47 by chuans0923
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭