| 查看: 1248 | 回复: 3 | ||
[求助]
请高手解答细胞瞬转蛋白提取及纯化
|
||
|
目前想得到一个改造过的蛋白，想通过瞬转COS-7后得到蛋白，免疫荧光检测目的蛋白已经得到较高表达（大于50%），想进一步纯化出我想要的蛋白，目前纯在的问题有以下几点： 1.细胞的裂解，因为要保证蛋白的活性，是不是还是采用温和的裂解方法，有没有比较好用的裂解液推荐一下。 2。因为我的蛋白等电点在9左右，想用阳离子交换层析的方法，拟采用SP SepharoseF F,用50mMOL的磷酸盐缓冲液，以0-1Mol 氯化钠洗脱。 3.用分子筛进一步纯化蛋白。 不知道这样的方法是否可行，本来想委托公司纯化，可是公司说必须从转染开始就委托给他们，否则不好说能得到多少纯化样品，而且答复是真核蛋白裂解细胞纯化得到的蛋白纯度很低，到不了50%，可是这种纯度没办法继续用于下游的活性鉴定！请高手帮忙看看！多谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有239人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 组织和细胞中，膜蛋白，胞浆蛋白，核蛋白提取裂解液区别
已经有5人回复
- 线粒体内膜蛋白 转定位表达在细胞膜上
已经有14人回复
- 花生或大豆水解过的蛋白质怎么样提取并纯化，要提率尽量高，纯度也尽量高?
已经有10人回复
- 细胞裂解提取细胞内的总蛋白，需要使用什么试剂盒，求推荐
已经有14人回复
- 提取细胞蛋白
已经有14人回复
- 求助蛋白纯化的高手
已经有5人回复
- 要做蛋白纯化了，求高手指教注意细节
已经有8人回复
- 请帮忙推荐下蛋白电泳装置， 或洒点蛋白纯化 or PAGE 经验啊！
已经有8人回复
- 动物细胞蛋白提取含量低
已经有11人回复
- 蛋白纯化一个很挠头的问题，请高手指教！
已经有7人回复
- 【求助/交流】细胞核内蛋白和细胞浆蛋白提取有什么区别？
已经有4人回复
- 【求助/交流】求解答：纯化后的蛋白跑胶有杂带
已经有4人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
- 【分享】高人整理的细胞总蛋白的提取
已经有17人回复
panda73
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 3
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 1201.3
- 散金: 44
- 红花: 2
- 帖子: 191
- 在线: 42.5小时
- 虫号: 985964
- 注册: 2010-03-30
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2013-03-09 15:46:07
2楼2013-03-09 10:56:01
4楼2013-03-09 17:03:37