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请高手解答细胞瞬转蛋白提取及纯化
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目前想得到一个改造过的蛋白，想通过瞬转COS-7后得到蛋白，免疫荧光检测目的蛋白已经得到较高表达（大于50%），想进一步纯化出我想要的蛋白，目前纯在的问题有以下几点： 1.细胞的裂解，因为要保证蛋白的活性，是不是还是采用温和的裂解方法，有没有比较好用的裂解液推荐一下。 2。因为我的蛋白等电点在9左右，想用阳离子交换层析的方法，拟采用SP SepharoseF F,用50mMOL的磷酸盐缓冲液，以0-1Mol 氯化钠洗脱。 3.用分子筛进一步纯化蛋白。 不知道这样的方法是否可行，本来想委托公司纯化，可是公司说必须从转染开始就委托给他们，否则不好说能得到多少纯化样品，而且答复是真核蛋白裂解细胞纯化得到的蛋白纯度很低，到不了50%，可是这种纯度没办法继续用于下游的活性鉴定！请高手帮忙看看！多谢啦 |
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panda73
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