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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 组织和细胞中，膜蛋白，胞浆蛋白，核蛋白提取裂解液区别
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jozsh

新虫 (小有名气)

[求助] 组织和细胞中，膜蛋白，胞浆蛋白，核蛋白提取裂解液区别

组织和细胞中，膜蛋白，胞浆蛋白，核蛋白提取裂解液区别

有人说提取膜蛋白要加2M还是7M的尿素，但是具体要加多少呢？？？？求配方啊！！！！！！！！！！核蛋白又怎么提取呢？？？？
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交流~
1楼 2012-12-26 17:06:08
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
核蛋白的提取，你可以找一下试剂盒，方便，效率也不错。
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2楼2012-12-27 09:54:55
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huiniss

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不太好弄啊，楼主最好查询SCI相关文献中这些蛋白的提取方法。如有一篇SCI中提到：Nuclear protein was extracted from the pelleted cells using the EpiQuik Nuclear Extraction Kit according to the manufacturer's instructions.
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3楼2012-12-27 10:56:48
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huiniss

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

无意间发现这个，希望对楼主有用：取各组股四头肌样品2 g，置入20%匀浆液（250 mmol/L蔗糖，10 mmol/L碳酸氢钠，5 mmol/L叠氮钠），匀浆后离心（1200 g）10 min，留上清液，190000 g离心1 h，制备蔗糖梯度（25%、30%、35%），150000 g离心2 h，细胞膜成分从25%蔗糖的上半层收集，细胞内膜成分为30%和35%蔗糖层交界处收集，以10 mmol/L碳酸氢钠，5 mmol/L叠氮钠溶液稀释各膜成分，190000 g离心1 h，以250 mmol/L蔗糖、50 mmol/L Tris （pH 7.4）溶液悬浮沉淀，所有过程在4℃进行。这样的话，是不是细胞膜就可以提取其蛋白质了？
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4楼2012-12-27 11:02:15
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月光薯片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huiniss at 2012-12-27 11:02:15
无意间发现这个，希望对楼主有用：取各组股四头肌样品2 g，置入20%匀浆液（250 mmol/L蔗糖，10 mmol/L碳酸氢钠，5 mmol/L叠氮钠），匀浆后离心（1200 g）10 min，留上清液，190000 g离心1 h，制备蔗糖梯度（25%、30 ...

请问，最后一部离心是取上清吗？为什么要用蔗糖和Tris悬浮？这个有点搞不清楚~谢谢~
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5楼2013-11-14 15:32:22
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邓邦利

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huiniss at 2012-12-27 11:02:15
无意间发现这个，希望对楼主有用：取各组股四头肌样品2 g，置入20%匀浆液（250 mmol/L蔗糖，10 mmol/L碳酸氢钠，5 mmol/L叠氮钠），匀浆后离心（1200 g）10 min，留上清液，190000 g离心1 h，制备蔗糖梯度（25%、30 ...

楼主 请问您用这个方法 提过膜蛋白么  或者你有没有什么方法可以提取膜蛋白的 找了好久都没有找到方法
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6楼2015-11-03 20:33:45
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